EXTRACCIÓN DE ESENCIAS Y SEPARACIÓN DE PIGMENTOS NATURALES

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B. Comparar los resultados obtenidos entre sí y con el resto de los grupos ¿Qué protocolo adecuado para el tipo de material vegetal empleado? Razonar la respuesta.

Respecto a los resultados obtenidos todos los grupos trabajaron con hojas diferentes por tanto el disolvente a utilizar es diferente para tener máxima adsorción de clorofilas. Es decir no es lo mismo hojas de rosas que espinaca debido a que la espinaca a las hojas de un árbol cualquiera, ya que las espinacas tiene más potencial de extracción de clorofila ya sea por alcohol o acetona.

Debemos también tener en cuenta que los pigmentos fotosintéticos de las hojas son 4: clorofila a, clorofila b, carotenos y xantofilas; Por tanto la lectura de la clorofila no puede ser 100% exacta ya que habrá cierta cantidad de xantofilas y carotenos que están inmersos en la lectura espectrofotométrica.

También se debe tener en cuenta que las hojas de todas las plantas son diferentes y como ejemplo las verduras, unas tienen más cantidad de carotenos, xantofilas,etc. Por eso un protocolo adecuado varía de acuerdo a la manera en que se trabaje la clorofila ya sea por disolventes o por cromatografía.

C. Relacionar la fórmula utilizada para la cuantificación de clorofilas con los espectros de absorción de los pigmentos fotosintéticos.

Las clorofilas tienen típicamente dos tipos de absorción en el espectro visible, uno en el entorno de la luz azul (400-500 nm de longitud de onda), y otro en la zona roja del espectro (600-700 nm); sin embargo reflejan la parte media del espectro, la más nutrida y correspondiente al color verde (500-600 nm). Esta es la razón por la que las clorofilas tienen color verde y se lo confieren a los organismos, o a aquellos tejidos, que tienen cloroplastos activos en sus células, así como a los paisajes que forman. En la fórmula de marker se puede observar lo siguiente:

[pic 21]

En la formula observamos que especifican la absorbancia debido a que en ese rango de longitud de onda se puede leer en el espectrofotómetro la coloración verde característica de la clorofila a. Así mismo en la clorofila total se maneja la siguiente ecuación:

)[pic 22]

En la cual se observa un rango de 645-665 donde se da la lectura de los dos tipos de clorofila tanto de a como de b debido a que químicamente y estructuralmente cambian en unos radicales, por tanto se da la sumatoria en diferentes longitudes de onda y con las constantes especificadas.

D. Calcular la concentración de clorofila a en el extracto inicial de la hoja de la hierba por la fórmula de marker .¿Cuantos miligramos se han extraído de la hoja de espinaca?

Protocolo 1(Acetona):

HOJAS DE ROSAS

Extracción con solventes (Acetona )

[pic 23]

[pic 24]

[pic 25]

Protocolo 2(Etanol):

HOJAS DE ROSAS

Extracción con solventes (Etanol )

[pic 26]

[pic 27]

[pic 28]

En este resultado podemos decir que para extraer la cantidad de clorofilas a ,el mejor disolvente es la acetona por diferentes propiedades químicas para identificar el pigmento verde y sea posible su absorción dentro del espectrofotómetro. Así mismo, se puede utilizar el etanol como disolvente ya que tiene una similitud en exactitud con los datos respecto a la acetona.

E. ¿Se han extraído todos los pigmentos?

Se podrá observar en (Anexo:1 papel whatman) de los papeles whatman que se vio los 4 colores que demuestran la presencia de pigmentos vegetales:

COLOR

PIGMENTO(Rf)

VERDE FUERTE

CLOROFILA B

VERDE CLARO

CLOROFILA A

AMARILLO

XANTOFILAS

NARANJA

CAROTENOS

En el procedimiento 1 añadiendo éter de petróleo únicamente solo se pudo observar más cantidad de clorofila a y de clorofila b y no se pudo denotar muy bien las xantofilas y se vio una pequeña raya con los carotenos.

En el procedimiento 2 usando una relación 0,2:1,8 de acetona y éter de petróleo se pudo observar las siguientes características: Se observa más claramente los colores, teniendo en cuenta más presencia de clorofila a y b, que de xantofilas y carotenos.

A partir de los dos procedimientos anteriores podemos denotar que las hojas de rosas son ricas en clorofila a y b, es decir más cantidad de cloroplastos en sus hojas, con altas cantidades de células fotosintéticas y además se observó baja cantidad de xantofilas y carotenos a diferencia de otras plantas como verduras que si las poseen.

F. ¿Qué es el 13,14 de la fórmula de marker?

Es la constante por la cual se multiplica la absorbancia de 665nm y nos da la clorofila a es decir es una constante que permite la lectura de la concentración de clorofila en cualquier hoja que contenga el pigmento. Podría decirse que influye en la medida de cuantificación de concentraciones de este tipo de clorofila

G. ¿Interfieren el resto de pigmentos en la determinación de clorofila a?

La clorofila a no se ve interferida ya que la longitud de onda en la cual se evalúa es específicamente para la medida de este pigmento, es decir que según la fórmula de marker no se vería afectado ya que las xantofilas,carotenoides y clorofila b, se lee en otra longitud de onda distinta, ya mencionado anteriormente por el color. Según algunos estudios los carotenoides no tienen una longitud de onda especifica por tanto habría un margen de error de un 5% por posibilidades que a 665nm correspondiente a la clorofila pueda leer ciertas cantidades de carotenoides y xantofilas.

3. ANEXOS: CUESTIONARIO

1.¿Que normatividad