Guía 5. Enzimas: aplicaciones industriales

...

Marque cuatro tubos de ensayo, y adicione 3 mL de la gelatina preparada en cada uno de los tubos.

En el tubo 2 añada inmediatamente trozos de piña fresca, en el tubo 3 adicione inmediatamente con la microespátula una pequeña cantidad de ablandador de carne comercial, en el tubo cuatro introduzca rápidamente un trozo pequeño de papaya fresca; agite los tubos para mezclar, llévelos a un baño con hielo, observe los tubos cada cinco minutos y verifique el proceso de gelificación durante media hora.

Después de terminar el experimento tome el tubo de ensayo No 1 que contiene gelatina gelificada y adiciónele media pastilla de pancreatina previamente macerada*; espere 15 minutos y observe.

*En un mortero macere la pastilla pankreoflat, use media pastilla y reserve el resto para el siguiente experimento.

Composición de la gelatina

En un tubo de ensayo mida 3 mL de muestra de gelatina sin enfriar y adiciónele 2 mL del reactivo de Biuret, observe los resultados.

4. Verificación de la actividad de la amilasa presente en medicamentos comerciales

Rotule dos tubos de ensayo, en el tubo 1 agregue 5 mL de solución de almidón y unas gotas de lugol, la aparición de un complejo color violeta le permitirán comprobar la presencia de un polisacárido.

En el tubo 2 agregue 5 mL de suspensión de almidón y media pastilla de pancretina (Pankreoflat) previamente macerada. Agite y espere algunos minutos. A continuación tome 1mL de esta solución en otro tubo de ensayo y realice una prueba de Benedict, para determinar la presencia de azúcares reductores.

Ensayo de Benedict.

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solución del carbohidrato y agregue 0.1 mL del reactivo de Benedict, caliente al baño maría. La formación de un precipitado amarillo o rojizo, es prueba positiva para carbohidratos reductores.

Si tiene dudas sobre el resultado del ensayo use como patrón una solución de glucosa

5. Verificación de activad de las proteasas presentes en detergentes

Rotule los tubos de ensayo del 1 al 3. Prepare la gelatina sin sabor como en el punto anterior. Divida la gelatina en tres porciones de 10mL colóquela en cada uno de los tubos y déjela enfriar toda la noche.

El monitor del curso puede tener preparada la gelatina antes de la práctica.

Preparación del detergente (monitor)

El siguiente procedimiento usa el mismo detergente y observa el efecto de la variación de la cantidad del mismo.

Pese 20g del detergente enzimático en polvo y colóquelo en un vaso de 250ml

Mida 90mL de agua destilada a continuación disuelva el detergente en el agua. Sí el detergente es líquido mida con una pipeta graduada 20mL.

El monitor le entregará los tubos con gelatina , marque el nivel de gelatina en cada uno de los tubos con un marcador y adicione en el tubo uno, 1 mL del detergente que quiere analizar en el tubo dos, 2 mL de detergente y en el tubo tres 1mL de agua destilada.

Deje los tubos en reposo por 24 horas. Observe que ha ocurrido con el gel y anote los resultados.

• Nota para el profesor:

Si desea puede repetir este procedimiento con tres 3 marcas diferentes de detergente

Si desea puede organizar a los estudiantes en grupos y trabajar el detergente en medio ácido o básico utilizando HCl o NaOH diluido para observar el efecto de las proteasas a diferentes pH.

También puede seleccionar diferentes temperaturas para evaluar la acción enzimática del jabón, pero no exceda los 30oC.

6. Verificación de la actividad de la invertasa

Prepare 3g de levadura fresca en 20 mL de agua destilada, déjela en reposo por veinte minutos.

(El monitor puede preparar la levadura para todo el curso, al inicio dela práctica)

Prepare tres tubos de ensayo y adicione los reactivos de acuerdo con la tabla 2.

Tabla 2.

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Solución 0.25M de sacarosa

3 mL de agua destilada

3 mL de la solución con levadura Fresca

3 mL de la solución con levadura

fresca

3 mL de la solución con levadura

fresca

Espere diez minutos.

Tome 2 mL de muestra de cada uno de los tubos y adicione 1mL de reactivo Benedict, llévelos a ebullición en baño María por tres minutos y observe los resultados.

Si tiene dudas sobre los resultados del ensayo haga un ensayo de Benedict por separado para una solución de glucosa.

7. Verificación de la actividad de las pectinasas en al elaboración de jugos

Tome dos vasos de precipitados y cada uno coloque aproximadamente 25 mL de jugo de mango, en uno de ellos agregue 0.5 mL de pectinasa y en el otro 0 ,5 de agua destilada.

Agite fuertemente usando una espátula o con un agitador magnético, espere 10 minutos.

Ponga una gasa en un embudo de filtración y colocar el embudo sobre en una probeta, con la ayuda de la espátula, vierta el contenido de cada vaso de precipitados en el embudo de separación y recoja el filtrado. Registrar la cantidad de jugo recogido en cada probeta.

8. Verificación de la actividad enzimática de lipasas pancreáticas y sales biliares

a. Rotular dos tubos A y B colocar 3 mL de agua destilada en el tubo 1 y 3 mL de aceite vegetal en el tubo 2, en el tubo adicione una pequeña cantidad de sales biliares, agite los tubos por treinta segundos y observe