Identificación y purificación de proteínas

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La cromatografía de afinidad es tan eficaz que en muchos casos no se requiere de otros pasos de purificación; sin embargo pueden necesitarse más pasos para conseguir la purificación de proteínas.

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1) Reacción de Millón.

Cuando se hierve la solución de una proteína con otra de nitrato y nitrito mercúrico, se forma un coagulo o una coloración rojo pardo. Se debe al grupo fenólico

2) Reacción xantoproteica

Cuando las proteínas se tratan por ácido nítrico concentrado dan coloración amarilla que pasa a anaranjada por adición de amoniaco. Se debe a los núcleos aromáticos que se nitran formando ácido pícrico y después picrato de amonio por el amoniaco.

Es la coloración amarilla que se produce en la piel en contacto con ácido nítrico.

Hágase la experiencia introduciendo una pluma blanca de ave en ácido nítrico y después en amoniaco

3) Reacción de Hopkins y Cole

El reactivo es el ácido glioxilico (CHO-CO-OH) disuelto en ácido acético glacial. Se agregan unas gotas a la solución de la proteína y después se deja resbalar por las paredes del tubo ácido sulfúrico concentrado; en la zona de separación de las dos capas se forma un anillo azul-violeta, debido a la existencia del triptófano.

4) Reacción de Pauli

El reactivo es ácido sulfanilico diazoado y produce un color rojo en un medio alcalinizado con carbonato de sodio, que pasa al amarillo al acidificar

5) Reacción de la ninhidrina

Por ebullición de la solución acuosa o neutra y agregando después el reactivo, aparece coloración azul, debida a los productos de hidrolisis de la proteína

6) Reacción del biuret

Si a la solución de la proteína se agregan unas gotas de solución de sulfato de cobre al 1% y lejía de sosa en exceso, aparece una coloración violeta o rosada.

Lo dan las proteínas y polipéptidos, pero no los aminoácidos y los dipéptidos. Su nombre es impropio pues no se debe al biuret sino a la presencia de los enlaces peptídicos

7) Reacción del sulfuro de plomo

Hiérvase la proteína con solución de sosa caustica y una sal de plomo . Se forma un precipitado negro de sulfuro de plomo, si en la proteína existen grupos -SH

8) Los reactivos de los alcaloides dan precipitados con la mayoría de las proteínas

https://prezi.com/hdbidtagt9ug/reacciones-de-caracterizacion-de-proteinas/

Véjar Rivera, Eva Irma. Proteínas. Bioquímica 1. Hermosillo, Sonora. Editorial Unison [2010] N°83 p25-26

McKee, T. (2009). Bioquímica: las bases moleculares de la vida. Barcelona, España: McGrawHill