LABORATORIO DE BIOQUÍMICA INFORME No. 1: ESPECTROFOTOMETRÍA Y CURVA DE CALIBRACIÓN

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Y = 135,25X – 0,0082 (ecuación de la recta a la cual obedece el experimento)

En donde Y corresponde a la absorbancia y equivale a 0,305 y X corresponde a la concentración, despejando la ecuación tenemos:

X = (Y + 0,0082)/ 135,25; por lo tanto, X (concentración) = 2,32 E-03 mol/L.

5. ANALISIS DE RESULTADOS

Al analizar los resultados de la absorbancia obtenidos para cada uno de los tubos expuestos a la radiación vemos que a medida que la concentración disminuye en la solución de azul de metileno, la absorbancia respectiva también disminuye.

En cuanto al resultado obtenido para la concentración de la muestra problema a través de la curva de calibración se encuentra muy aproximado a valores de absorbancia obtenidos con concentraciones muy parecidas, lo que indica que probablemente la concentración obtenida sea muy cercana a la real.

6. PREGUNTAS

6.1 ¿Qué es una curva de calibración?

R. Una curva de calibración es la representación gráfica en un plano de dos variables experimentales obtenidas en cierto trabajo de laboratorio y que fueron medidas previamente por equipos. Se emplea en trabajos cuantitativos en los cuales hay que calcular la concentración de sustancias. Se ensayan varias soluciones de concentración conocida y se determina una propiedad medible de ellas, construyéndose la curva de calibrado, que es una recta. Una vez ensayadas las soluciones problemas, su concentración se averigua por interpolación directa sobre el grafico arrojado en la curva de calibración. La elaboración de la curva de calibración es la fase principal al montar y estandarizar cualquier procedimiento fotométrico.

6.2 ¿Qué características debe cumplir?

R. La curva de calibración debe cumplir con características de exactitud (esto depende del material a utilizar así como de cualidades de la persona a realizar el trabajo experimental), precisión, repetitibilidad, reproducibilidad; por lo que se debe tener en cuenta que las curvas de calibración: cubran el intervalo de concentración de interés, tener una composición de matriz tan parecida como se pueda a la de las soluciones de las muestras problema y que se realice un análisis de una solución blanco.

6.3 ¿Se pude construir una curva de calibración con sustancias no coloreadas?

R. Si, a pesar de que la luz traspasa los cuerpos o soluciones incoloras es posible utilizar técnicas para lograr que sustancias no coloreadas como azúcares, aminoácidos o sales después de alguna reacción capaz de convertir sustancias incoloras en derivados coloreados, de los cuales si se pueda tomar la absorbancia y por medio de datos estadísticos realizar una curva de calibración y tener los datos correspondientes al compuesto no coloreado.

6.4 ¿Por qué razón se eligió una sola longitud de onda para hacer todas las mediciones de la curva de absorción?

R. La idea de elegir una sola longitud de onda para realizar todas las mediciones se fundamenta en que el equipo pueda detectar solo la cantidad de luz absorbida por las partículas presentes de azul de metileno y no la de otras sustancias; con el fin de obtener datos más exactos.

6.5 ¿Qué significado tiene la pendiente de la grafica?

R. La pendiente de la curva de calibración a la concentración de interés se define como la sensibilidad del instrumento, la sensibilidad viene limitada por la pendiente de la curva de calibración y la reproducibilidad o precisión del sistema de medida, para dos métodos que tengan igual precisión, el que presente mayor pendiente en la curva de calibración será el más sensible.

6.6 ¿Que son las desviaciones de la ley de Beer y cuáles son sus principales causas?

R. La proporcionalidad entre la absorbancia y la concentración únicamente se cumple para disoluciones muy diluidas, observándose desviaciones más o menos acusadas al aumentar la concentración; las desviaciones de la ley de Beer pueden clasificarse de la forma siguiente:

Reales: el índice de refracción varía con la concentración, por lo que la absortividad no es rigurosamente constante para cualquier concentración, provocando desviaciones negativas.

Instrumentales: son desviaciones proporcionadas netamente por el equipo y que tienen que ver con la radiación monocromática, radiaciones parasitas y errores de lectura.

Químicas: estas desviaciones pueden surgir por la naturaleza de la sustancia; es decir si tiene la propiedad de interactuar con el solvente y convertirse en otras especies; de igual forma interviene las condiciones fisicoquímicas a las que se realizó el experimento y las impurezas presentes en el medio a difractar.

Personales: son asociadas al mal uso del estudiante frente al equipo y todo lo que esto involucre.

7. CONCLUSIONES

De esta práctica podemos concluir que la absorbancia es una propiedad de las sustancias que varía con la cantidad de partículas presentes en la solución a analizar, lo que quiere decir que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de una sustancia.

También podemos decir que la concentración obtenida a partir de la curva de calibración para la muestra problema se encuentra muy cercana a los datos obtenidos experimentalmente para una de las muestras que fue medida como parte de la curva de calibración, lo que quiere decir que este método se convierte en una herramienta muy apropiada para encontrar este tipo de incógnitas. Sin embargo esto no quiere decir que sean resultados exactos puesto que también confirmamos que existen márgenes de error y leyes que pueden afectar los resultados obtenidos, porque el dato de concentración arrojado para la muestra problema, según los datos experimentales debería ser mayor al dato obtenido; sin embargo se debe tener en cuenta que también influyen factores fisicoquímicos, de manejo del equipo y de la naturaleza de la sustancia y del solvente en el cual se encuentren.

8. REFERENCIAS

- Consultada el 29 de febrero de 2016, 20:20.

- http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf

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