LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA,

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- BACITRACINA

1.- Se prepararon 1.098g de agar base antibiótico en 36ml de agua destilada, se dejó hidratar por un lapso no mayor a 15min.

2.- posteriormente fue sometido a la autoclave durante un periodo de 30min. Una vez que transcurrió ese tiempo, se dejó que se enfriara un poco para que así se hiciera el vaciado en placa, en una caja de Petri estéril.

3.- Se dejó solidificar, y posteriormente con ayuda del mechero y un asa esterilizada se hizo la siembra y se colocó un disco de papel filtro previamente esterilizado y con la Bacitraciona y se presionó suavemente.

4.- Se incubó a 36°C por 24 horas.

- PRUEBA DE CAMP

1.- 1.- Se depositaron 0.72g de agar sangre en 18ml de agua destilada, posteriormente se dejó hidratar durante 15 min y posteriormente con ayuda del mechero se hirvió durante 1 min. Para después ser llevados a la autoclave y así esterilizarse por 30 min.

2.- Transcurrido los 30min de que estuvo en la autoclave, se depositaron 10ml de sangre en dicho matraz con el agar sangre se dejó reposar unos minutos y después se hizo el vaciado en placa en cada una de las cajas Petri previamente estériles.

3.- Se dejó solidificar, y posteriormente se hizo una estría de estafilococo y perpendicularmente se hizo una estría con la colonia en estudio.

4.- Incubar a 36°C por 24 horas.

- SAL Y MANITOL

1.- Se preparó el agar sal y manitol, y se depositaron 5ml en cada tubo, fueron sometidos a la autoclave durante 30min.

2.- Posteriormente se colocaron los tubos en forma de pico de flauta.

3.- Una vez que solidificó, se hizo la siembra de la colonia en el tubo.

4.- Se metió a la incubar a una temperatura de 36°C durante 24 horas.

- TINCIÓN DE GRAM

FROTIS

1.- Con la ayuda de un mechero, se flameó un asa bacteriológica hasta el rojo vivo y se esperó a que enfriara un poco.

2.-Se tomó con la ayuda de una jeringa esteril unas gota de agua salina y se agregó en un portaobjetos.

3-.Se flameó nuevamente el asa y se esperó a que enfriara.

4.-Con el asa se tomó un poco de muestra bacteriana a partir de una colonia aislada.

5.-Después se agregó la muestra en la gota de agua que estaba en el portaobjetos y se homogeneizó suavemente con movimientos circulares.

6.-Se esperó a que secara al aire libre.

TINCIÓN

1.- Se agregó cristal violeta, sobre suficiente para que se cubra el extendido bacteriano y se dejó actuar durante 60 segundos.

2.- Se agregó el lugol, solo el suficiente, y también se dejó actuar durante 60 segundos.

3.-Se enjuagó con agua de grifo.

4.-Se agregó una o dos gotas de alcohol-acetona e inmediatamente se enjuagó con agua de grifo.

5.- Se agregó Safranina, solo en la suficiente, y se dejó actuar durante 60 segundos. Se enjuagó con agua corriente.

6.- Se secó a temperatura ambiente.

7.-Se observó en un microscopio óptico con un objetivo 100X usando aceite de inmersión.

Algunas imágenes referentes a la práctica.

[pic 3]

Preparando el agar

[pic 4]

Calentado el agar para esterilizar

[pic 5]

En el autoclave

[pic 6]

Vaciado en cajas petri

[pic 7]

Vaciando en tubos de ensayo

[pic 8]

Agar sangre

[pic 9]

Agar chocolate

[pic 10]

Agar 110

[pic 11]

Preparando los pico de flauta

[pic 12]

Preparando caldo

[pic 13]

Ya sembrados las bacterias en las pruebas bioquímica

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TRATAMIENTO DE DATOS

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1.-Se determinarán las pruebas bioquímicas o las técnicas para el aislamiento de enterobacterias Gram Positivas.

2.-Se deberá realizar las pruebas bioquímicas para determinar el género de las enterobacterias presentes en las pruebas bioquímicas de Catalasa y Oxidasa, Camp, Novobicina y Bacitracina, DNasa, Coagulasa.

3.- En la prueba bioquímica de la oxidasa, se realizara en un trocito de papel de filtro, de forma que colocamos una gota del reactivo de Kovacs en el papel y posteriormente tomaremos parte de nuestra colonia con el asa de siembra, que frotaremos sobre el papel. El resultado será positivo si se produce una reacción de color a los pocos segundos.

4.- En la prueba bioquímica de la catalasa, en esta prueba se va a degradar el peróxido de oxigeno que se produce como consecuencia de la acumulación de oxígeno. Para esto en un tubo de ensayo se colocara 2 o 3 ml de peróxido de oxígeno, se tomara muestra con el asa de siembra y se introducirá en el tubo, el resultado será positivo si se observa la producción de pequeñas burbujas.

5.-