Laboratorio de Bioquímica - Práctica No. 1 Fotocolorimetría y curva de calibración

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2.2 Escribir a continuación el modelo de cálculo empleado para hallar las concentraciones correspondientes a la anterior tabla (a excepción de las soluciones problema que necesita de la curva de calibración). Recordar que se trata de una dilución donde pueden emplear la siguiente expresión: (C1 x V1 = C2 x V2). Para el modelo de cálculo solo basta poner como ejemplo el tubo.

[pic 2]

[pic 3]

1.[pic 4][pic 5]

2.3 Graficar los datos de absorbancia vs concentración (de los patrones) para obtener la curva de calibración. Mostrar la ecuación de la recta obtenida y el coeficiente de correlación al interior del gráfico. ¿Qué significado tiene la pendiente de la recta?

[pic 6]

Se puede inferir de la gráfica que la pendiente muestra una amplia relación entre la concentración de la muestra y la absorbancia, lo que quiere decir que a una mayor concentración se obtendrá una mayor absorbancia.

2.4 Por interpolación de la gráfica anterior, determinar las concentraciones de las muestras problema.

Tubo 7: 0.05 mg/mL

Tubo 8: 0.50 mg/mL

2.5 Empleando la ecuación de Beer-Lambert, calcular las concentraciones de las muestras problema y compararlas con el resultado del numeral anterior. Expresar el modelo de cálculo empleado.

[pic 7]

[pic 8]

Para el tubo 7:

[pic 9]

[pic 10]

[pic 11]

[pic 12]

Para el tubo 8:

[pic 13]

[pic 14]

[pic 15]

[pic 16]

2.6 Consultar los interferentes más comunes que puede presentar este método fotocolorimétrico de cuantificación de proteínas empleando el reactivo de Biuret. Consultar y describir brevemente qué otros métodos de cuantificación de proteínas se emplean actualmente, se dará cuenta que el de Biuret no es el único colorimétrico ni el mejor de estos.

Método

Ventajas

Inconvenientes

Métodos de

Absorción

No se pierden las muestras

Interfieren muchos compuestos que absorben en el UV

Métodos Derivados Colorimétricos

Biuret

Bastante específico para proteínas Muestra pocas interferencias Es barato

Tiene poca sensibilidad y sólo se recomienda para la cuantificación de proteínas en preparados muy concentrados; con algunos carbohidratos y lípidos es capaz de formar un complejo con el ion Cu2+

Lowry

Tiene bastante

sensibilidad

No todas las proteínas reaccionan igual Muestra muchas interferencias como detergentes no iónicos, sulfato amónico etc.

Bradford

Muy sensible

Muestra interferencias con detergentes

BCA

Es el método más sensible Es el que muestra menos interferencias

Métodos Derivados Fluorimétricos

o-ftalaldehido

Muy sensible

La interferencia de aminas contaminantes en la muestra

No todas las muestras reaccionan igual

Referencias:

- http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/27%20M%C3%89TODOS%20PARA%20LA%20CUANTIFICACI%C3%93N%20DE%20PROTE%C3%8DNAS.pdf