METABOLISMO BACTERIANO. LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL

...

4.1.4 PRUEBA DE OXIDASA.

Se tomo la muestra de cultivo y se froto en la cinta, se comparo la coloración con las expresadas en el tarro y observamos que la prueba fue positiva.

Figura 6: Muestra de cultivo de bacterias de suelo en cinta para prueba de oxidasa.

[pic 16][pic 17]

Fuente: estudiantes de ingeniería agroindustrial.

4.2 DESDOBLAMIENTO DE CARBOHIDRATOS.

- AGAR DE HIERRO KLIGER. En este medio se realizó la prueba de degradación de azúcares glucosa y lactosa y se observó luego de 48 horas.

4.2.1 PRUEBA DE DEGRADACIÓN DE AZUCARES. Resultado Positivo para ambas azucares. Pues el tubo tomó una coloración amarilla.

Figura 3: Muestra de cultivo de bacterias de suelo en Agar Kliger.

[pic 18][pic 19]

Fuente: estudiantes de ingeniería agroindustrial.

- AGAR SIMMONS CITRATO. En este medio se realizó la prueba de citrato, se observo luego 48 de incubación.

4.2.2 PRUEBA DE CITRATO. Resultado negativo el tubo no cambio de color, permaneció siendo verde oscuro. La Prueba da resultado positivo si el color cambia a azul.

Figura 4: Muestra de cultivo de bacterias de suelo en Agar Simmons Citrato.

[pic 20][pic 21]

Fuente: estudiantes de ingeniería agroindustrial.

5. ANALISIS DE RESULTADOS

5.1 REACCIONES PROTEINICAS.

- AGAR SIM. El Sim Medio, es un medio semisólido destinado a verificar la movilidad, producción de indol y de sulfuro de hidrógeno en un mismo tubo. Es útil para diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.

5.1.1 Prueba de Motilidad. Los resultados obtenidos fueron positivos debido a que al dejar en incubación la muestra en el medio Sim por 48 horas se observó una turbidez producida alrededor y más allá de la línea de la siembra.

5.1.2 Prueba de Indol. El resultado de esta prueba fue negativo, pues luego de 48 horas y al agregar el reactivo de Kovac´s la coloración del medio de cultivo no presento el anillo rojo - fucsia, es decir, las bacterias del cultivo de suelo utilizadas para esta prueba no tienen la capacidad de metabolizar el aminoácido triptofano para formar el indol, el cual se combina con el aldehído del reactivo de de Kovac´s, para originar el compuesto de color rojo que indica que la prueba es positiva.

5.1.3 Prueba de Ácido Sulfhídrico. El resultado de esta prueba fue negativo pues no hubo presencia de precipitado negro luego de 48 horas de incubación. Las bacterias reductoras de sulfato producen acido sulfhídrico el cual reacciona con el amonio ferroso y se produce un sulfato ferroso (H2S) que se forma como un precipitado oscuro a lo largo de la línea de inoculación. Por tanto se puede decir que las bacterias utilizadas para esta prueba no son capaces de reducir el sulfato

- CALDO DE UREA. Esta base es usada en la preparación de medios para la diferenciación de microorganismos, especialmente las Enterobacterias con base a la producción de ureasa.

5.1.4. Prueba de caldo de urea. El resultado de la prueba fue negativo, luego de 48 horas el medio no presentó el viraje de color rosado intenso o rojo. Las bacterias utilizadas para esta prueba no tienen la capacidad de hidrolizar la urea la cual forma el dióxido de carbono y el amoníaco. Este último proporciona reacción alcalina al medio, que puede comprobarse por el viraje del amarillo al rojo púrpura del indicador de pH rojo fenol contenido en el medio.

5.1.5 Prueba de Catalasa. Esta prueba manifestó un resultado positivo debido a la presencia de burbujas, la catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias. Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.

5.1.6 Prueba de la Oxidasa. El resultado obtenido de esta prueba fue positivo, esto se debe a que los los microorganismos utilizados para la prueba contienen la enzima citocromo-c-oxidasa en su cadena respiratoria y en presencia de oxígeno atmosférico y citocromo c, se oxida el sustrato presente en los discos a un compuesto de color rosado a fucsia o morado azuloso.

5.2 DESDOBLAMIENTO DE CARBOHIDRATOS.

- AGAR DE HIERRO KLIGER. Medio de cultivo frecuentemente usado en microbiología de alimentos para la diferenciación de enterobacterias, en base a la fermentación de glucosa y lactosa, y a la producción de ácido sulfhídrico.

5.2.1 Prueba de Degradación de Azúcares. Los resultados obtenidos de esta prueba fueron positivos para glucosa y para lactosa, las bacterias del cultivo utilizadas para esta prueba son capaces de fermentar los dos carbohidratos. La degradación de la lactosa ocurre en la parte superior mientras la de glucosa en el fondo del medio de cultivo.

- AGAR SIMMONS CITRATO. El agar citrato de Simons es usado para la diferenciación de Enterobacterias y otras bacterias gram negativas sobre la base de la utilización del citrato como fuente de carbono.

5.2.2 Prueba de Citrato. El resultado de esta prueba fue negativo. No se presento cambio de verde a azul oscuro. Esta prueba permite identificar aquellos microorganismos capaces de utilizar fosfato de amonio y citrato de sodio como única fuente de nitrógeno y carbono respectivamente, estos microorganismos crecen en este medio produciendo una reacción alcalina y evidenciando un cambio de color por la presencia de un indicador azul de bromotimol cambiando el medio de verde a azul.

6. CONCLUSSIONES

- Se desarrollaron habilidades de identificación de los microorganismos a partir de distintas pruebas bioquímicas.

- Se conocieron y realizaron las principales pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismos. Para este caso se utilizaron los microorganismos de un cultivo de suelo.

- Se consultaron y aprendieron los fundamentos de las pruebas bioquímicas realizadas en la práctica y las sugeridas por el docente en el cuestionario. Se diferenciaron las reacciones proteínicas de las de desdoblamiento de carbohidratos.

-