METABOLISMO Y PATOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA DE LABORATORIO ENZIMAS II

...

- Fosfatasa acida:

Fosfatasa Acida Total: menor de 11 U/l

Fosfatasa Acida Prostática: menor de 4 U/l

- Cuál es la especificidad como biomarcador de la fosfatasa alcalina para el diagnóstico de enfermedades

R// La fosfatasa alcalina es una hidrolasa con muy poca especificidad de sustrato. Se encuentra presente en casi todos los tejidos del cuerpo, especialmente, en epitelio intestinal, túbulos renales, hueso, hígado y placenta. Su localización celular es la membrana. Los individuos de los grupos sanguíneos B y O secretores tienen la isoenzima intestinal aumentado en sus sueros.

Presenta en circulación isoenzimas: tejido inespecífico (constituida por las formas múltiples: hepática, ósea, renal, glóbulo blanco y otras), intestinal, placentaria

La fracción hepática es termoestable, en cambio, la fracción que proviene del hueso, sistema reticuloendotelial y vesicular, es termolábil. Las isoenzimas se diferencian por su estructura molecular, propiedades físicoquímicas, antigénicas y catalíticas.

Tabla3. EFECTO DEL MAGNESIO Y EL CITRATO SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA.

SOLUCION

TUBO (ml)

Blanco

1

2

3

4

5

Agua destilada

2.7

1

0.8

0.6

0.7

0.4

Buffer pH 9.6

0.3

1.0

1.0

1.0

1.0

1.0

pNFP 1 mM

-

0.9

0.9

0.9

0.9

0.9

Cl2Mg 0.1M

-

-

0.2

0.4

-

0.4

Citrato de sodio 0.2M

-

-

-

-

0.3

0.2

Enzima

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

0.1

Absorbancia

0

0.508

0.518

0.596

0.652

0.520

- ¿Qué efecto tiene el magnesio sobre la actividad de la fosfatasa alcalina? ¿Por qué?

El magnesio afecta la función y estructura de la fosfatasa alcalina. No activa la enzima pero incrementa su actividad. El magnesio controla los lugares de unión estructurales y catalíticos modulando la actividad enzimática resultante.

- ¿Qué efecto tuvo el citrato de sodio sobre la reacción enzimática? ¿Por qué?

R// Comparando los resultados obtenidos en la anterior gráfica, se puede inferir que la presencia del citrato de sodio en la muestra disminuye la absorbancia, y por consiguiente la cantidad de sustrato obtenido.

El citrato de sodio es una sal del ácido cítrico, un compuesto orgánico simple que se constituye uno de los metabólicos del ciclo de los ácidos tricarboxilicos. Generalmente los microorganismos que emplean el citrato como única fuente de carbono, utilizan sales de amonio como única fuente de nitrógeno. El metabolismo del citrato realizado, por algunas bacterias se realiza por el ciclo de Krebs y requiere el desdoblamiento del citrato.

DISCUSION DE RESULTADOS

CONCLUSIONES

- Se pudo determinar con la ecuación de Lineweaver- Burk como funciona la actividad enzimática utilizando el Km y la velocidad máxima de la enzima fosfatasa alcalina y se logró observar el efecto de que tiene de acuerdo a las diferentes concentraciones del sustrato, el efecto del fosfato, el magnesio y el citrato sobre la actividad enzimática.

- podemos concluir sobre la importancia que tiene el estudio de las reacciones enzimáticas en el diagnóstico de enfermedades.

COMPLETAR CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFIA

- http://www.infobioquimica.com/wrapper/CDInterpretacion/te/bc/194.htm

- Gil, F. (2012) El papel de los biomarcadores en Toxicología Humana. Facultad de Medicina de la Universidad de Granada.

- Díaz, J., Fernández, M. T., Paredes F. (1997) Aspectos básicos de bioquímica clínica.Madrid. Díaz de Santos.