Práctica de laboratorio: Enzimas
Enviado por Helena • 18 de Abril de 2018 • 1.271 Palabras (6 Páginas) • 355 Visitas
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- Tapar los tubos con papel parafilm y mezclarlos.
- Observar y hacer anotaciones.
RESULTADOS ESPERADOS
Un resultado positivo se observará con una coloración violeta.
c) Curva de calibración para albúmina
- Del stock de albúmina al 1% toma una alícuota en un vaso de precipitado.
- Haz una serie de 6 tubos de ensayo por triplicado como se indica en la tabla, a excepción del blanco que solo se pone un tubo:
Tubo
Albúmina 1.0%
Agua
Reactivo de Biuret
Absorbancia a 545 nm
1 (blanco)
---
---
5 ml
2
100 µl
900 µl
5 ml
3
150 µl
850 µl
5 ml
4
300 µl
700 µl
5 ml
5
600 µl
400 µl
5 ml
6
1000 µl
-------
5 ml
Muestra 1*
¿
¿
5 ml
Muestra 2
¿
¿
5 ml
Muestra 3
¿
¿
5 ml
Muestra 4
¿
¿
5ml
*Los tubos para las muestras serán proporcionados por el profesor para que exclusivamente les adiciones 5 ml del reactivo de biuret.
- Tapar los tubos con papel parafilm, mezclarlos e incubar 15 minutos a temperatura ambiente.
- Leer en el espectrofotómetro a 545 nm ajustando a cero con el blanco.
CUESTIONARIO:
- Investiga el fundamento de la prueba de la ninhidrina y explica tus resultados. Incluye aquí las observaciones (imágenes, dibujos) de tu experimento. ¿Por qué tanto en el tubo 2 como 3 tuviste resultados positivos?
- Investiga el fundamento de la prueba de Biuret y explica tus resultados. Incluye tus observaciones, ¿por qué solo en el tubo 3 tuviste resultado positivo?
- Con tus valores por triplicado saca la media y la desviación estándar, y presenta tus resultados en forma de tabla.
- Haz la curva de calibración para la albúmina completándola siguiente tabla. No olvides en cada punto indicar la media ± la desviación estándar. Además mete los datos a una regresión lineal en tu calculadora para que saques los valores de Y corregidos y obtengas el mejor ajuste. A lado de la gráfica indica el valor de la pendiente (m), la ordenada el origen (y) y el coeficiente de regresión lineal (r).
Tubo
Concentración de albúmina (mg/tubo)
Absorbancia
1
2
3
4
5
6
- Con tu gráfica y los ajustes hechos interpola los valores de tus muestras en la gráfica para que obtengas las concentraciones de albúmina de tus muestras. Haz lo mismo calculando la x corregida con tu calculadora.
- Explica que significa el valor de la media ± la desviación estándar.
- Haz una lista de los aminoácidos esenciales y no esenciales.
- Forma el siguiente tetrapéptido: glicina, fenilalanina, tirosina y treonina. Indica con un recuadro el enlace peptídico. ¿Cuántas moléculas de agua se formaron?
- ¿Qué es un Dalton?
- ¿Cuál es el peso molecular de la glicina y la fenilalanina?
- ¿Cuál es el peso molecular de la albúmina? Calcula de cuántos aminoácidos aproximadamente está formada esta proteína.
- Menciona y explica 2 técnicas bioquímicas por las cuales puedas separar proteínas de acuerdo a su peso molecular.
- Menciona y explica 1 técnica bioquímica por la cual puedas separar una proteína de acuerdo a alguna característica específica.
- Define y explica ¿qué es una amiloidosis y una prionosis?
- Define y explica que es la conformación nativa de una proteína.
BIBLIOGRAFÍA:
-Nelson, D.L. y M.M. Cox., Lehninger: Principles of Biochemistry, 4ta Edition, Worth Publishers, New York 2005.
- Switzer R., Garrity L., Experimental Biochemistry: Theory and exercises in fundamental methods, 3rd edition, Freeman and Company, New York, 1999.
-Manual de prácticas de laboratorio de Química
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