Laboratorio de enzimas

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Teniendo en cuenta estos valores, se calculó los µmoles de glucosa aplicando las diluciones para cada una de las concentraciones utilizadas, las cuales fueron graficadas en función del tiempo, como se observa en las figuras 2, 3, 4, 5 y 6.

[pic 2]

Figura 2. Concentración de producto [P] (µmoles) vs Tiempo (min) al 1% de maltodextrina.

[pic 3]

Figura 3. Concentración de producto [P] (µmoles) Tiempo (min) al 2% de maltodextrina.

[pic 4]

Figura 4. Concentración de producto [P] (µmoles) Tiempo (min) al 3% de maltodextrina.

[pic 5]

Figura 5. Concentración de producto [P] (µmoles) vs Tiempo (min) al 4% de maltodextrina.

[pic 6]

Figura 6. Concentración de producto [P] (µmoles) vs Tiempo (min) al 5% de maltodextrina.

Teniendo entonces las gráficas de [P] vs t es posible calcular las velocidades iniciales de reacción de sustrato para cada una de las concentraciones utilizadas las cuales se obtienen de la pendiente de la fase lineal inicial de las curvas obtenidas, las cuales se observan en la tabla 3. (Vera, 2007)

Tabla 3: Valores de Vo (µmol/min) para cada concentración de maltodextrina.

[S]

Vo (µmol/min)

1%

15,291

2%

29,699

3%

84,383

4%

82,999

5%

65,981

Con estos valores se graficó el inverso de la velocidad inicial Vo (µmol/min) vs el inverso de la concentración de sustrato [S] expresado en mmoles, la cual se observa en la figura 7.

[pic 7]

Figura 7. Grafica de 1/Vo vs 1/[S]

Según la Ecuación de Lineweaver-Burk la cual se observa en la figura 8 teniendo las velocidades iniciales y las concentraciones de sustrato, se grafican los inversos, y de la ecuación obtenida de la gráfica se obtienen los valores de los parámetros de Michaelis-Menten (Km y Vmax). (Vera, 2007)

[pic 8]

Figura 8. Ecuación de Lineweaver-Burk

Estos parámetros (Km y Vmax) calculados se observan en la tabla 4.

Tabla 4. Parámetros (Km y Vmax) de Michaelis-Menten

Vmax

416,666667

Km

290,791667

Este valor de Vmax indica que aunque se adicione una mayor cantidad de sustrato dicha velocidad no va a variar con las condiciones dadas ya que todos los centros activos están ocupados con sustrato, mientras que la constante Km es la concentración de [S] a la cual Vo es igual a Vmax/2, además hace referencia a la afinidad que presenta la enzima con el sustrato. (Vera, 2007)

CONCLUSIÓN

En la determinación de la cinética de enzimática de la glucoamilasa durante el desarrollo experimental del mismo, se observó que a medida que transcurre el tiempo el sustrato disminuye su concentración produciendo la glucosa. La ecuación de Michaelis-Menten, permitió establecer mediante la relación lineal de Lineweaver-Burk, que la velocidad máxima de reacción enzimática fué de 416,67 µmol/min, y que el valor de Km fue de 290,79.

BIBLIOGRAFÍA

- L. Vera. Enzimas: qué son y para qué sirven. Rev. Real Academia de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales (Esp). Vol. 101, Nº. 2, pp 399-417, 2007

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