“Medidas De Crecimiento Microbiano (Turbidimetría; Escala De Mcfarland)”

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Se pesaron 10 gr. de la muestra, agregar 90 ml. de agua peptonada al 0.1 % (dilución -1), luego se homogenizó en Stomacher.

Se prepararon diluciones (-3), (-4) y (-5) tomando 1 ml de la (-1) y agregando a 90ml de agua peptonada, para formar la dilución (-3).

Por otro lado se tomaron 10 ml de la (-3) y se colocaron en 90ml de agua peptonada para formar la dilución (-4). Por último se tomaron 10 ml de la (-4) en 90ml de agua peptonada para formar la dilución (-5).

Sembramos en Plate Count Agar 1 ml, de cada dilución, por duplicado.

Se incubaron a 35 °C las muestras, durante 48 hs.

PARTE C. Recuento de las placas y preparación de tubos para comparar con escala de Mcfarland.

Realizamos el conteo de colonias en las distintas diluciones e informamos el número de UFC/ gr. de muestra.

Se tomaron colonias con el ansa de ojal y se disolvieron en los tubos que contenían 5 ml de agua peptonada. Luego se inoculó, formando distintas diluciones (2 o 3) según la turbidez que observamos.

Entonces obtuvimos muestra 1, muestra 2, muestra 3.

PARTE D. Comparar las muestras 1, 2 y 3 con los tubos de la escala de Mcfarland.

Sobre un fondo de hoja blanca comparamos los tubos donde disolvimos las colonias con los tubos de la escala, y estimamos a qué número de la escala correspondía cada tubo.

PARTE E. Verificación del resultado obtenido por turbidez.

Según el resultado obtenido por escala de Mcfarland de las muestras 1, 2 y 3, realizamos las diluciones necesarias para verificar la concentración obtenida por turbidimetría, en placas con siembra por vertido.

Sembramos 1 ml. de cada dilución en placa con PCA, por duplicado.

Se incubaron 48 hs. a 35 °C.

Observaciones de resultados:

Resultados:

Mesófilas

(-4)

449,5x10 4

(-5)

140x10 5

Se observó que el crecimiento fue muy disperso, no se presentó una gran formación de colonias como se esperaba debido a que la descomposición de la muestra no era mucha. Esto afecto la disolución que se comparó con la escala de Mcfarland, ya que cuando quitamos con el ansa desde la placa que presentaba mayor crecimiento celular la muestra a inocular fue insuficiente y no logro alcanzar la turbidez del nivel 1 de la escala. Debido a esto realizamos dos siembras una manera directa (-1) y una a la (-4), modificando la parte E del práctico.

Las siembras de estos arrojaron resultados incontables de UFC.

En cuanto al testigo, no presentó ningún crecimiento de microorganismos indicando que las placas se esterilizaron de manera correcta y el medio no estaba contaminado.

Conclusiones:

Logramos preparar los estándares de la escala de Mcfarland y realizar comparaciones a pesar de que el inóculo presento poca turbidez.

Anexo:[pic 3]

[pic 4][pic 5]