TRABAJO PRÁCTICO N°6. MEDIDAS DE CRECIMIENTO MICROBIANO

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Parte II: preparación de la muestra y siembra por método de vertido

- Se pesan 10 g aproximadamente de la muestra.

- Se agregan 90 ml de agua peptonada al 0,1% (dilución -1).

- Se homogeniza en Stomacher.

- Se preparan diluciones (-3) tomando 1 ml de la (-1) y se agregan a 90 ml de agua peptonada 0,1%.

- Se siembra en Plate Count Agar 1 ml de cada dilución por duplicado.

- Se incuban a 35°C las muestras por 48 horas.

Parte III: recuento de la placas y preparación de tubos para comparar con escala de MacFarland

- Se realiza un conteo de colonias en las distintas diluciones y se informa el número de UFC/ gr. de muestra.

- Se toman colonias con el ansa de ojal y se disolven en los tubos que contienen 5 ml de agua peptonada. Se inocula y se forman distintas diluciones (2) según la turbidez observada.

- Entonces se tiene muestra 1 y muestra 2.

Parte IV: comparar las muestras 1 y 2 con los tubos de la escala MacFarland

Sobre un fondo de hoja blanca se comparan los tubos donde se disolvieron las colonias con los tubos de la escala, y se estima a qué número de la escala corresponde.

Parte V: verificación del resultado obtenido por turbidez

- Según el resultado obtenido por escala de Mc Farland de las muestras 1 y 2, se realizan las diluciones necesarias para verificar la concentración obtenida por turbidimetría, en placas de siembra por vertido.

- Se siembra 1 ml de cada dilución en placa con PCA, por duplicado.

- Se incuban 48 horas a 35 °C.

RESULTADOS

Parte III

Conteo de UFC/ml de las placas, aplicando la fórmula:

UFC/ml= recuento * (1/dilución) * (1/volumen de muestra)

PCA/ dilución (-1)

- Placa 1: Incontable directo

- Placa 2: Incontable directo

PCA/ dilución (-3)

- Placa 1: 4000 UFC/ml

- Placa 2: 1000 UFC/ml

Nota: Testigo contaminado, conteo no corresponde a la muestra.

Parte IV

- La muestra 1 corresponde a la escala N°1 de MacFarland.

- La muestra 2 corresponde a la escala N°4 de MacFarland.

Parte V

Muestra 1

- Dilución 3, placas 1 y 2: Incontable directo

- Dilución 4, placa 1: UFC/g[pic 1]

- Dilución 4, placa 2: UFC/g[pic 2]

Promedio dilución 4: UFC/g[pic 3]

Muestra 2

- Dilución 3, placas 1 y 2: Incontable directo

- Dilución 4, placa 1: UFC/g[pic 4]

- Dilución 4, placa 2: UFC/g[pic 5]

Promedio dilución 4: UFC/g[pic 6]

CONCLUSIÓN

Para indicar la calidad de un alimento, el análisis de la cantidad de microorganismos mesófilos aerobios es uno de los más importantes porque son estas bacterias los principales patógenos para el ser humano. En esta práctica se determinó una cantidad de U.F.C/ml para leche superior a lo que se acepta normalmente en la industria, constituyendo casi el doble de lo indicado en el marco legal. También se realizó el recuento de U.F.C/ml de psicrófilas, donde se obtuvo un número superior a un millón, lo cual concuerda con el hecho de que la muestra era de leche cruda. Por esta razón es que se la debe someter a procesos de enfriamiento y calentamiento, porque dadas las condiciones necesarias, como fueron brindadas en la incubación, estas bacterias proliferan ampliamente.

En lo que refiere al agua, es uno de los medios de mayor propagación de patógenos para el ser humano, por lo que lo observado durante el recuento de mesófilas concuerda. Otro punto a destacar es el hecho de que no presenta U.F.C de coliformes totales, lo cual es importante dado que su presencia es un claro indicativo de contaminación del agua. Los restantes datos obtenidos en materia de microorganismos mesófilos, incluso los anteriormente mencionados, son relativamente normales considerando muestras no tratadas o crudas, no representando un peligro altamente potencial. En cuanto al recuento de U.F.C en el ambiente del laboratorio debería haberse obtenido una cantidad baja, porque se debe trabajar en las condiciones más altas de esterilidad posibles.

WEBGRAFÍA

- http://www.respyn.uanl.mx/viii/3/articulos/calidad_de_agua.htm

- http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis230.pdf

- https://www.um.es/nutbro/docs/hica/Microorganismos_marcadores.pdf