PRODUCCION DE PROTEINA UNICELULAR SACCHAROMYCES CEREVISAE POR MEDIO DE SUERO DESLACTOSADO.
Enviado por karlo • 4 de Diciembre de 2017 • 2.302 Palabras (10 Páginas) • 440 Visitas
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-Etapas de la Fermentación.
Pre-fermentación
Preparación del material
Se lavó todo el material de vidrio [pic 4][pic 5]
A los tubos se le agregaron 9 ml de agua destilada [pic 6][pic 7]
Se colocaron tapones a los matraces y tubos de ensayo y encima papel aluminio [pic 8][pic 9]
Se etiqueto todo el material a esterilizar [pic 10][pic 11]
Se esterilizo en autoclave [pic 12]
*Esterilizar un volumen de 2000ml de suero de leche en el frasco de fermentación, junto con las mangueras y filtros acoplados. Se aplicó una temperatura de 115ºC durante 20 minutos, empleando una autoclave.
Fermentación
Inoculación
- Se inoculó en un Erlenmeyer con 100 ml de caldo Saborou glucosado y se incubó a una temperatura de 30ºC. Se incubaron durante cinco horas, previas a la fermentación. La concentración celular se midió por medio de una cámara de Neubauer. [pic 13]
Dispositivo de la fermentación
Se esterilizo el dispositivo con termómetro, pipeta de 10 ml para la toma de muestra, una pipeta de 5 ml para la entrada de aire, y una salida de gas.
En la pipeta de 5 ml se colocó un difusor de aire
Posteriormente, se selló el dispositivo con silicón
En la salida de gas se colocó una manguera con una trampa de gas
En la pipeta de muestra se colocó una manguera para tomar la muestra más fácilmente
En la entrada de aire se colocó una manguera colocada a una bomba de pecera, el aire pasaba a través de un filtro.
Medición de parámetros
- Mantener los paramentos constantes durante el proceso de fermentación, fueron temperatura de 20 a 25°c aproximadamente, flujo de aireación por medio de la bomba pecera y agitación manualmente
- Para realizar la medición de parámetros se tomaron muestras cada 24 horas durante una semana y a esas muestras se le hacían análisis.
Post-fermentación
Recuperación del producto (Levadura saccharomyces cerevisiae)
Una vez terminada la fermentación, el material se separó la parte liquida de la parte sólida.
Se hizo una decantación para sacar el liquido y dejar el solido que es lo que filtraremos
Posteriormente, el resto se filtró atreves de un papel filtro whatman no. 42, colocados en embudos y matraces. [pic 14]
Para aumentar la velocidad de filtración se utilizó una bomba con un matraz kitasato. [pic 15]
El producto obtenido en el papel filtro, se colocó en la estufa, por un tiempo de 24 a una temperatura de 38° C.
Una vez pasado las 24 horas se procedió a obtener el producto, mediante un raspado al papel filtro para obtener el producto.
ANALISIS
AZUCARES REDUCTORES TOTALES
- haga una dilución de la muestra 10ˉ³
- colocar 5 ml del suero diluido en un matraz aforado de 250 ml
- Diluya la muestra con agua destilada en un matraz aforado de 250 ml
DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES
- Transfiera 1 ml. del suero diluido a un matraz volumétrico aforado de 100ml. Y añada 5 ml de reactivo de ferrocianuro de potasio
- Coloque los matraces en un baño maria de agua hirviendo por 10 min
- Enfriar los matraces en hielo
- Neutralice el contenido de los matraces con 1 ml de solución de acido sulfúrico
- Mezcle los contenidos de los matraces suavemente hasta que no emanen más gases
- Añada 4 ml de arsenomolibdato
- Mezcle una vez más el contenido de los matraces
- Afore a 100 ml con agua destilado
- Toma una celda del espectrofotómetro y transfiera ahí el contenido de cada matraz (uno por celda)
- Efectué la lectura en el espectrofotómetro a 520 nm.
CRECIMIENTO POR CAMARA DE NEUBAUER
- Lavar la cámara y cubrir con agua destilada y alcohol al 96 %.
- Secar bien con el papel suave.
- Poner el cubreobjetos encima de la cámara.
- Remover el cultivo.
- Tomar la muestra con una pipeta Pasteur.
- Poner la punta de la pipeta en la cámara.
- Si se crea aire repetir el proceso desde el principio.
- Ajustar el microscopio.
- Esperar unos minutos antes de contar para que la levadura se deposite en la cámara.
Peso seco
Se tomaron muestras DE 5 ML y se colocaron en tubos correspondientes al numero de muestras [pic 16]
Los tubos de ensayo son llevados a la centrifuga donde hacen girar a 4000 rpm, por un tiempo de 10 min[pic 17]
Luego pasamos a pesar cada tubo de ensayo en la balanza analítica y anotamos los pesos[pic 18]
Posteriormente, se llevan los tubos a la estufa, a una temp. De 605°C por un tiempo promedio de 3 horas[pic 19]
Pasado el tiempo anotaremos, los pesos y se realizan los cálculos
[pic 20]
Viabilidad
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