PRÁCTICA(S): REACCIONES DE AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS. PRECIPITACIÓN, SEPARACIÓN Y PUNTO ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS
Enviado por monto2435 • 12 de Diciembre de 2018 • 1.239 Palabras (5 Páginas) • 856 Visitas
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Reacción de plomo para cisteína. [pic 3]
Cuando los aminoácidos y las proteínas que contienen grupos tiólicos se calientan en medio fuertemente alcalino, el azufre presente reacciona para formar sulfuros. Este sulfuro puede detectarse por la formación de un precipitado negro de sulfuro de plomo por adición de acetato de plomo. Los grupos tioles también reaccionan con el nitroprusiato de sodio en presencia de un exceso de amoníaco para dar un complejo de color rojo.
Reacción de la Ninhidrina.
La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis, también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos.[pic 4]
Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido
Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay proteínas, pero si hay aminoácidos libres. La principal función de esta prueba es identificar grupos aminos libres.
Reacción de Hopkins-Cole.[pic 5]
La reacción de Hopkins-Cole, también conocida como reacción de Adamkiewiczs, es una prueba estándar para el triptófano y para las proteínas que contienen triptófano. La solución que se va a examinar se mezcla con ácido glioxílico y se agrega ácido sulfúrico concentrado. Un anillo entre violeta y rojo en la unión de los dos líquidos indica que la reacción es positiva.
Reacción de Millón.
El Reactivo de Millón es un Ensayo químico que sirve para saber si existe tirosina en la solución, si esto es así se genera un coágulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne. El reactivo de Millón se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en una parte de ácido nítrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica.[pic 6]
Reacción Xantoproteica.
Los aminoácidos, que contienen un núcleo aromático forman nitro derivados de color amarillo cuando se calientan con ácido nítrico concentrado. Las sales de estos derivados son de color naranja intenso en medio alcalino La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color amarillo oscuro. La Fenilalanina, la tirosina y en cierto grado el Triptófano, así como todas las proteínas que los contienen, dan positiva la prueba. La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un compuesto coloreado amarillo a pH ácido.[pic 7]
Reacción de Biuret.
El Reactivo de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición desconocida. Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.[pic 8]
Discusión.
Conclusiones.
Bibliografía.
- Ángela. (2011). Pruebas Cualitativas para Aminoácidos y Proteínas. 26/08/2017, de Blogger.com Sitio web: http://angela-bioqumica.blogspot.mx
- Cordova Alciro. (2012). Proteínas y aminoácidos. 26/08/2017, de scribd Sitio web: https://es.scribd.com
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PRECIPITACIÓN, SEPARACIÓN Y PUNTO ISOELÉCTRICO DE PROTEÍNAS
OBJETIVOS.
- Analizar el efecto que produce la modificación de factores fisicoquímicos sobre la solubilidad de las proteínas
- Determinar el punto isoeléctrico de la insulina, basándose en sus propiedades de solubilidad a diferentes valores de pH.
RESULTADOS.
Tabla 1. Resultados de salting-out
Biuret
Interpretación
Filtrado 1
Positivo
El resultado es una prueba positiva debido a que hay proteínas solubles en el sobrenadante.
Precipitado 1
Positivo
La prueba es positiva debido a la presencia de proteínas precipitadas.
Filtrado 2
Positivo
La prueba da positivo debido a que aun hay presencia de proteínas.
Precipitado 2
Negativo
La prueba de Biuret da negativo logrando así la ausencia de proteínas en el último precipitado.
Tubo No.
1
2
3
Clara de huevo filtrada, dil. 1:3 (mL)
3.0
3.0
3.0
HCL 0.1 N (mL)
1.0
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