Polifenoles del arbol del argan.

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Los flavonoides son compuestos hidrosolubles, uno de los subgrupos son las antocianinas, estas poseen poder antioxidante lo cual les confiere actividad terapéutica neutralizando los radicales libres. Además los flavonoides tienen actividad antiinflamatoria, previenen algunos tipos de cáncer, entre otros beneficios (1,2). Una de las operaciones necesarias una vez extraídos estos compuestos es apartarlos del resto de los componentes, la operación utilizada industrialmente es conocida como adsorción en columna también llamada cromatografía frontal.

Metodología.

Se realizó el descorticado del maíz azul y separación por densidad, con el material obtenido se realizó la extracción sólido-líquido y el extracto fue sometido a centrifugación, filtración convencional, microfiltración y ultrafiltración. El extracto ultrafiltrado fue empleado como alimentación en el proceso de adsorción, empleando la resina comercial SP-207, durante el tiempo de proceso se tomaron muestras a la salida de la columna y se determinó la absorbancia a pH 1 y pH 4,5 a 520 y 700 nanómetros para determinar la absorbancia ponderada que está relacionada directamente con la concentración de antocianinas, de esta información se trazo la curva de ruptura y quiebre. La elución se realizó con metanol. Para evaluar la purificación se realizaron pruebas fitoquímicas de flavonoides, saponinas, alcaloides y quinonas.

Las flavonas y los flavonoles son poco solubles en agua, mientras que los dihidroflavonoles son muy solubles. Todos los flavonoides son muy solubles en metanol.

Estos compuestos incluyen sustancias coloreadas como las antocianinas, presentes en gran cantidad en frutos, flores y brácteas donde dan colores azules, violetas y rojos. Las chalconas tienen color anaranjado, los flavonoles y flavonas amarillo y las leucoantocianidinas son incoloras. Considerando la acción farmacológica de los flavonoides, los más importantes son aquellos que derivan del difenil-1,3-propano ó 2- fenil-benzopirano pues poseen un grupo carbonilo en C4, como por ejemplo las flavonas (Gros et al., 1985). Estos compuestos se encuentran generalmente unidos a azúcares en forma de glicósidos.

Extracción

Se mantuvo en ebullición 20 g de capítulos secos de Cs con 200 ml de agua destilada durante 20 minutos (2x). Los extractos se redujeron a presión reducida hasta consistencia butirosa obteniéndose un rendimiento de 36,74 % de extracto acuoso seco. 20 Ciencia Veterinaria. Facultad de Ciencias Veterinarias. U.N.L.Pam. – 2002 El residuo fue resuspendido con metanol (3 x 10 ml). Los extractos fueron llevados a sequedad a presión reducida obteniéndose un rendimiento de 15,95 % de extracto metanólico seco. Este extracto fue resuspendido con 10 ml de agua destilada y 25 ml de HCl 2 N y colocado en baño maría durante 20 minutos para hidrolizar los glicósidos de los flavonoides. La fracción fue colectada, filtrada y extraída con 10 ml de acetato de etilo (3x). La fracción acetato de etilo fue llevada a sequedad en rotavapor dando un rendimiento de 0,44 %. Los distintos extractos dieron resultados positivos a las reacciones de caracterización de Shinoda (Shinoda, 1928) y cloruro férrico (Geissman, 1962), revelando la presencia de grupos fenólicos característicos de los flavonoides. Esta fracción fue utilizada para sembrar en placas de capa fina, las bandas correspondientes a Rfs iguales a 0,80 y 0,89 fueron recuperadas, eluídas con metanol y evaporadas bajo corriente de nitrógeno. Cada fracción fue resuelta por HPLC y luego identificada por espectrometría de masas. Una alícuota del extracto metanólico seco fue resuspendido con metanol y cromatografiado en capa fina junto a estándares auténticos de canferol, quercetina, apigenina y rutina. Cromatografía en capa fina (CCF) La fracción acetato de etilo fue concentrada en rotavapor y se aplicó en forma de banda sobre placas de sílica gel 60 Aº K6F de 250 µm de espesor (5 x 20 cm). El cromatograma se desarrolló utilizando un sistema de solventes compuesto por acetato de etilo-metanol (100:10, v/v). Las bandas con similares Rfs a los estándares auténticos de quercetina y canferol fueron recuperadas, eluídas con 1 ml de metanol (3 x) y evaporadas bajo una corriente de nitrógeno. Una alícuota de extracto metanólico seco resuspendido con metanol se cromatografió utilizando placas de sílica gel 60 Aº K6F de 250 µm de espesor (5 x 10 cm) en forma conjunta con estándares auténticos de quercetina, canferol, rutina y apigenina. Se desarrollaron dos cromatogramas diferentes utilizando como sistema de solvente acetato de etilo-metanol (10:1, v/v) para uno de ellos y para el otro tolueno-cloroformo-acetona (40:25:35, v/v/v). Cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC) Cada fracción fue resuelta por HPLC con un equipo Isco Model 2360 de gradiente programable, equipado con un detector Model Isco V4 de longitud de onda multivariable y una bomba Isco Model 2350 (Isco, Lincoln, EE.UU.). Se utilizó un cartucho de fase reversa LiChroCART (4 x 250 mm) con guarda columna fase reversa LiChrospher 100 RP-18. Ambos compuestos fueron eluídos con 15-100 % metanol en agua durante 35 minutos.

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Table 1:

Phenol and diphenol derivatives and their occurrence in argan parts or preparation