Práctica 1. MANEJO DE MICROPIPETAS AUTOMÁTICAS

...

En esta práctica realizada logramos hacer un buen manejo de cada Micropipeta, solo manejamos agua para observar la diferencia de volúmenes en cada tubo que utilizamos, esto se hizo con el fin de saber si existen errores en el pipeteo de la persona que maneja la Micropipeta o bien que exista un mal ajuste en ésta.

Analizando los resultados podemos ver que los valores que se encuentran bastante alejados de la media son los volúmenes de la Micropipeta de mayor cantidad, esto nos indica que entre mayor sea un volumen pipeteado existe mayor probabilidad de cometer errores. Sin embargo existen valores bastante dispersos en las otras Micropipetas estos pueden ser causa de un pipeteo erróneo por parte del estudiante.

CUESTIONARIO

- ¿Cuáles suelen ser las causas más comunes del mal micropipeteo en el laboratorio y como podrían corregirse?

- El uso de las punteras.

- Mantenimiento y la limpieza del instrumento.

- Proceso de pipeteado y el ritmo de pipeteo.

- Ángulo de inclinación de la pipeta.

- Profundidad de inmersión.

- Periodo de espera.

- Falta de trazabilidad (calibración).

Se puede mejorar mediante una buena capacitación acerca del uso de Micropipetas, esto permitirá que las personas las utilicen de forma adecuada.

- ¿Cuál es el motivo de mantener siempre la pipeta en posición vertical?

Garantiza que no se presente incertidumbre por variaciones mínimas en la cabeza del líquido.

- ¿Qué resultados se esperan cuando en una práctica del laboratorio no se miden con exactitud los volúmenes de alguna muestra o líquido?

Que no se lleven a cabo reacciones químicas, perdida de rendimiento, amplio margen de error, perdidas de la muestra, entre otros.

- ¿Porque en biología molecular se usan volúmenes tan pequeños a diferencia de otras áreas?

Porque es un área que trabaja con material genético, éste se obtiene en cantidades pequeñas y para analizarlo mediante distintas técnicas se deben usar volúmenes pequeños de los reactivos a utilizar, de lo contrario la muestra se perdería.

- ¿Qué me indican las Micropipetas que usan puntillas amarillas y azules?

El volumen máximo que alcanza la Micropipeta, las puntas azules son utilizadas para grandes volúmenes y las amarillas para volúmenes pequeños.

- ¿Cuál es la diferencia entre las Micropipetas de volumen variable y las de volumen fijo?

Las de volumen fijo dispensan un volumen predeterminado de líquido (volumen nominal) y las de volumen variable permiten ajustar el volumen a ser dispensado dentro de un rango determinado en las especificaciones de la pipeta.

BIBLIOGRAFÍA

http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/cd29/laboratorio/cap16.pdf

http://gicuv.univalle.edu.co/07_Laboratorios/01informacion_laboratorios/02Material-de-consulta/documentos/Gu%EDa_manejo_micropipetas_agosto_18_2013%20(1).pdf

http://jorge-contreras.webs.com/guia-El%20uso%20de%20micropipeta-BM.pdf

Universidad de Guanajuato

DCNE

Laboratorio de Biología Molecular

Dra. María del Carmen Cano Canchola

Liliana de la Cruz Echeveste

Equipo 5

Lic. Biología Experimental

Práctica 2. CUANTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DEL GRADO DE PUREZA Y CALIDAD DE ÁCIDOS NUCLEICOS

INTRODUCCIÓN.

Luego de la extracción del ADN, es necesario cuantificar y analizar la calidad de las moléculas obtenidas. Uno de los métodos más utilizados para la cuantificación del ADN es el análisis de la absorción UV, ya que los nucleótidos poseen máximos de absorción alrededor de 260nm. Para evaluar la pureza de la muestra debe determinarse la proporción OD 260nm/OD 280nm. Si la relación es mayor a 1,6 puede estimarse que la muestra es lo bastante pura para confiar en la cuantificación espectrofotométrica.

La calidad de las moléculas extraídas se analiza por electroforesis en gel de agarosa. La agarosa es un polisacárido altamente purificado derivado del agar. Se utiliza para separar macromoléculas tales como ácidos nucleicos y grandes complejos proteicos. Mediante la electroforesis podemos separar fragmentos de ADN y ARN en función de su tamaño, visualizarlos mediante una sencilla tinción, y de esta forma determinar el contenido de ácidos nucleicos de una muestra, teniendo una estimación de su concentración y grado de entereza.

La electroforesis en geles de agarosa es el método estándar para separar y purificar fragmentos de ADN cuando no requerimos un alto poder de resolución. El rango de tamaños que pueden separarse es mucho mayor en un gel de agarosa (moléculas desde 50 pb hasta unas 40 kb) dependiendo de la concentración del mismo. Los geles de agarosa convencionales se corren en una cámara de electroforesis horizontal, con un campo eléctrico uniforme y constante.

Dentro de esta práctica se evaluará la pureza de una muestra de DNA con el fin de capacitar a los alumnos a realiza un gel de agarosa y un buen pipeteo de volúmenes pequeños así como el depósito de cada muestra en los posos del para posteriormente analizar el corrimiento de la muestra.

OBJETIVO

El alumno analizará la pureza y calidad de ácidos nucleicos extraídos, mediante espectrofotometría de luz ultra violeta y electroforesis en geles de agarosa.

EXPERIMENTACIÓN

MATERIALES Y REACTIVOS.

- Cámara de electroforesis submarina

- Fuente de Poder

- Transiluminador UV

- Registrador