Práctica No.1 Introducción al laboratorio de Microbiología

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El microscopio es el instrumento más frecuentemente utilizado y el más útil en un laboratorio de microbiología, proporciona la amplificación que nos permite ver organismos y estructuras invisibles a simple vista. Permiten una amplia gama de amplificaciones, desde cien a cientos de miles de veces. Podemos observar forma, tamaño, características tintoriales y ciertas estructuras presentes en los microorganismos

Las dos categorías de microscopios disponibles son los microscopios ópticos y los microscopios electrónicos. Los microscopios ópticos utilizan un sistema de lentes ópticos y comprenden los microscopios de campo claro, campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases. Los microscopios electrónicos emplean flujos de electrones en lugar de ondas de luz por lo que, con el microscopio óptico ordinario o el de contraste de fases las estructuras más pequeñas que pueden observarse tienen unos 0,2 µm, con el microscopio electrónico pueden verse fácilmente objetos de 0,001 µm.

Materiales y Métodos

Material

Reactivos

Muestra y/o cepa

Porta y cubreobjeto

Mechero, pipeta pasteur

lugol

Cultivo de protozoarios

Biopélicula oral

Procedimiento

Cultivo de protozoarios

- Cortar hojas, zacate, flores o mezclas de estos y colocar todo en un frasco tipo Gerber con una pequeña cantidad de tierra.

- Agregar suficiente agua de la llave hasta cubrir completamente.

- Dejar reposar durante 3 días en un lugar fresco y sin tapar herméticamente el frasco. No olvidar llevar al laboratorio.

Preparación húmeda

- Tome dos portaobjeto limpio y secos, por separado flaméelos para eliminar grasa, en uno con la ayuda de una pipeta Pasteur colocar una gota de cultivo de protozoarios, en el otro portaobjeto una gota de solución salina en la cual mezclará biopelícula oral tomada con un hisopo desechando éste en un recipiente conteniendo desinfectante.

- Colocar encima de cada portaobjeto un cubreobjeto cuidando que todo quede dentro del portaobjeto y de que no queden burbujas.

- Observar al microscopio y anotar resultados.

Manejo adecuado del Microscopio

- Si es necesario mover el microscopio hágalo con una mano en el brazo y otra debajo de la base.

- Coloque el microscopio sobre una superficie plana, limpia y libre de objetos o material que pudiera entorpecer la labor. Acomodarlo con los oculares y platina frente a usted.

- Colocar el portaobjetos con la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas.

- Con el objetivo de menor aumento en posición de uso hacer ascender la platina con el tornillo macrométrico.

- Iniciar la observación con el objetivo de menor resolución, 4 aumentos (4X) y después con el de (10X) y (40X) para parásitos y hasta (100X) si la preparación es de bacterias.

Para realizar el enfoque:

- a) Acercar al máximo la lente del objetivo (4X) a la preparación, subiendo la platina con el tornillo macrométrico hasta observar difusamente la preparación.

- b) Una vez logrado el mayor acercamiento entre la preparación y el objetivo, observar a través de los oculares y ascender y descender lentamente la platina con los tornillos macrométrico y micrométrico hasta lograr un enfoque del material presente en la preparación.

- Luego colocar el siguiente objetivo de mayor aumento (10X) la imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el tornillo micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de (40x) enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: 1) incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y 2) mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

- Girar el objetivo seco fuerte (40x), fuera de la trayectoria de observación. Adicione una gota de aceite de inmersión sobre el área del portaobjetos, ajuste el objetivo de inmersión (100X) en posición y enfoque la preparación con el tornillo micrométrico. Registre sus observaciones.

- Cuando haya finalizado su observación, gire el revólver para colocarlo en el objetivo de menor aumento (4x). Nunca haga girar el objetivo seco fuerte (40X) sobre el aceite de inmersión.

- Limpie cada uno de los objetivos, usando un trozo papel y si es necesario con solución para lentes el exceso de aceite del portaobjetos primero elimínelo mediante el uso de un trozo de las llamadas sanitas (toque el objetivo varias veces moviéndolo de lugar hasta que no quede aceite en la sanita) y posteriormente termine de limpiar frotando el objetivo con un trozo de papel especial para lentes o de un pañuelo desechable.

- Cúbralo sin desconectar el microscopio al estar fijo, si no, colóquelo en su lugar de la misma manera que lo tomó.

Observaciones

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Resultados:

Protozoarios Biopelícula oral

[pic 1][pic 2]

Conclusión

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Recomendaciones

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