Químico Farmacéutico Biólogo

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2.- Repita el paso 1 para las demás muestras incluyendo un control positivo y uno negativo provisto en el kit. Use un nuevo pocillo en la fila A que cambie la punta de la pipeta para cada muestra o control para mejores resultados

Incuba la placa con el espécimen y el diluyente por 15 minutos adicionales a 37·c

3.- a) Inserte el peine (con el lado impreso hacia Ud.) en los pocillos de la fila A que contiene las muestras y los controles mezcle: retiré o inserte el peine en los pocillos varias veces

b) Deje el peine en la fila A e incube por 60 minutos a 37·c active el cronometro. Después de 30minutos de incubación mezcle como en el paso 3 mezcle una vez más durante la incubación. hacia el final de los 60minutos perfore el papel de aluminio de la fila B Usando el perforador no habrá mas pocillos de los necesarios

c) Al cumplirse los 60minutos saque el peine de la fila A absorba el líquido adherido a las puntas de los dientes apoyándolos sobre un papel absorbente limpio no toque la superficie frontal del diente

PRIMER LAVADO FILA B

4.- Inserte el peine en los pocillos de la fila B agite: inserte y retire vigorosamente el peine en los pocillos durante al menos 10 segundos para que quede bien lavado. Repita el lavado varias veces agitando en el trascurso de 2 minutos mientras tanto perfore el papel aluminio de la fila c después de 2 minutos retire el peine y absorba el líquido adherido como en el paso 3c

UNIÓN DEL ANTI-HBS BIOTINILADO (FILA C)

5.-Inserte el peine en los pocillos de la fila c mezcle como en paso 3ª incube la bandeja de desarrollo con el peine durante 10 minutos ( use el cronometro) a 37·c perfore el papel aluminio de la fila D mezcle una vez más durante la incubación después de 10 minutos retire el peine y absorba el líquido adherido

UNIÓN DE LA AVINA MODIFICADA /FOSFATASA ALCALINA (FILA D)

6.- Inserte el peine en los pocillos de la fila D mezcle incube la bandeja de desarrollo con el peine durante 5 minutos (use el cronometro) a 37·c perfore el papel aluminio de la fila E. Mezcle una vez más durante la incubación después de 5 minutos retire el peine y adsorba el líquido adherido

SEGUNDO LAVADO (FILA E)

7.- Inserte el peine en los pocillos de la fila E agite repetidamente durante 2 minutos como en el paso 4. Mientras tanto perfore el papel aluminio de la fila F. Después De 2 Minutos, retire el peine y adsorba el líquido adherido

REACCIÓN DE COLOR (FILA F)

8.-Inserte el peine en los pocillos de la fila F mezcle incube la bandeja de desarrollo con el peine durante exactamente 10 minutos (use el cronometro) a 37·c mezcle una vez más durante la incubación después de 10 minutos retire el peine

DETENCIÓN DE LA REACCIÓN (FILA E)

9.- Inserte de nuevo el peine en la fila E. Después de un minuto retire el peine y déjelo secar al aire

ELIMINACIÓN DE LOS DESECHOS

Deseche la bandeja de desarrollo usadas las puntas de la pipeta el papel absorbente y los guantes como materiales biocontaminante

Resultado

[pic 6]

En la imagen se puede observar que el resultado obtenido es negativo, comprobando que ninguno de los pacientes tiene Hepatitis B.

Prueba de Hepatitis (HBsAg)

Paciente

Positivo

Negativo

Interpretación

Elizabeth

X

No es inmune: no está infectado, pero aun corre el riesgo de posibles infecciones futuras.

Berenice

X

En la técnica por ELISA, las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la línea de corte se considera que no contiene HBsAg, de acuerdo al límite de sensibilidad de la técnica. Las muestras con valores de absorbancia superiores o iguales al valor de la línea de corte se consideran inicialmente reactivas y deberán repetirse. Si vuelve a tener valores de absorbancia superior o igual a la línea de corte, deberá ser confirmada con alguna técnica confirmatoria.

Discusión

En base a los resultados se obtuvieron respuestas negativas en ambos casos, tomando en cuenta que existen factores que pudieron afectar dicha prueba dando un falso negativo o falso positivo, lo cual es necesario realizar otras pruebas para comprobar la viabilidad del resultado teniendo en cuenta esto, no asegura que los pacientes no se contagien ya que se necesita de una vacuna para la prevención de este virus,

Conclusión

Al terminar la práctica se concluyó que la prueba ELISA es una de las técnicas más utilizadas para la detección de hepatitis ya que utilizan un anticuerpo anti-HBsAg en fase sólida, que se une al antígeno presente en el suero del paciente, el cual reacciona frente a un conjugado marcado con una enzima, la que en contacto con un sustrato apropiado, desarrolla una reacción colorimétrica, la que puede ser leída visualmente. Algunas veces es necesario comprobar los resultados con otro tipo de pruebas para obtener un resultado más viable.

Referencias

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