TRABAJO PROCESAMIENTOS DE ALIMENTOS Y LABORATORIO II
Enviado por Rimma • 31 de Mayo de 2018 • 654 Palabras (3 Páginas) • 355 Visitas
...
---------------------------------------------------------------
---------------------------------------------------------------
[pic 2]
Figura 1. Representación del consumo de en diferentes concentraciones de L-lactato sódico a través del tiempo.[pic 3]
---------------------------------------------------------------
Tabla 2. Datos de la concentración vs pendiente a los 5 segundos.
Concentración L-lactato sódico (mM)
Pendiente (5segundos)
7
0,0034
5
0,0032
3
0,003
2
0,003
0,5
0,0026
0,3
0,0024
0,2
0,0018
0,15
0,0016
0,07
0,0012
0,05
0,001
0,03
0,0009
0,02
0,0006
[pic 4]
[pic 5]
Tabla 3. Datos de la velocidad de reacción en función de la concentración vs pendiente.
Concentración L-lactato sódico (mM)
Pendiente (5 segundos)
Velocidad de reacción
(mg O2/ L*s-1)
2
0,003
666,666667
0,5
0,0026
192,307692
0,3
0,0024
125
0,2
0,0018
111,111111
0,15
0,0016
93,75
0,07
0,0012
58,3333333
0,05
0,001
50
0,03
0,0009
33,3333333
[pic 6][pic 7]
[pic 8]
---------------------------------------------------------------
CÁLCULO DE LA ECUACIÓN DE HANES WOOLF
[pic 9]
[pic 10]
[pic 11]
[pic 12]
[pic 13]
ANTECEDENTE
Para el cálculo de la cinética enzimática se utilizan dos ecuaciones: el método de Lineweaver Burk con un porcentaje de error del (50-54%) y Hanes Woolf con un porcentaje de error del (5%). La representación de Hanes Woolf ofrece datos más confiables ya que las estimaciones de la correlación y Km tienen una mayor aproximación, es decir, si se tiene una correlación cercana a 1 el Km tiende a ser menor durante la solución del problema. (Ritchie & Prva, 2010).
DISCUSIÓN
Al desarrollar el ejercicio propuesto en base a los datos obtenidos de un análisis de laboratorio a concentraciones bajas desde 0,02 hasta 7mM de L-lactato oxidasa se graficó el consumo de oxígeno frente al tiempo figura (1). Para evaluar la pendiente y que la relación sustrato-enzima sea la idónea los valores estuvieron comprendidos entre 0,03 y 2mM en un tiempo de 5segundos con lo que se procedió a realizar el cálculo de la cinética de saturación de la L-lactato oxidasa donde se pudo observar que a medida que la concentración aumenta, la velocidad de reacción se incrementa figura (2).
Con los datos obtenidos de la velocidad de reacción y en función de la concentración vs la pendiente se obtuvo la recta de calibrado de la L-lactato oxidasa donde se tomaron los datos de 0,03 hasta 2mM, donde la linealidad fue aproximada a 1, así se puede observar en la figura (3) que R2=0,9986.
Para determinar la Km se utilizó la ecuación de Hanes Woolf mediante la cual se pudo estimar el parámetro cinético con la finalidad de analizar la compatibilidad de L-lactato oxidasa con el sustrato. Durante el análisis del ejercicio el valor de Km= 0,11mM con una Vmax de 0,00317 (mg de O2/ L*s-1) nos indica que la relación enzima-sutrato tienen compatibilidad o una alta afinidad.
Taurinoa, Reissb, & Richterb, (2013) mencionan que la L-lactato oxidasa proveniente de Aerococcus viridans obtuvo un Km de 0,119 ± 0,03 mM alcanzando una Vmax de 3,72 ± 0,18 U/mg. En el trabajo de Bhavna & Ritu, (2015) se determinó la Km= 0,83mM de L-lactato oxidasa lo que nos permite concluir que esto 2 trabajos confirman una alta afinidad de la enzima-sustrato.
REFERENCIAS
Bhavna, H., & Ritu, P. (2015). Polypyrrole/ carbon nanotubes/ lactate oxidase nanobiocomposite film based modified stainless steel electrode lactate biosensor. Science Direct, 176-185.
Ritchie, R., & Prva, T. (2010). Current statistical methods for estimating Km and Vmax
...