Transformación de E. Coli con ADN plasmídico
Enviado por Eric • 30 de Octubre de 2018 • 839 Palabras (4 Páginas) • 337 Visitas
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2. ¿Por qué es necesario incubar las bacterias a 37°C antes de extenderlas sobre la
placa de Petri?
Para darles la temperatura óptima de trabajo de las enzimas celulares y permitirle expresar toda la información genética incluida la del plásmido introducido.
3. ¿Qué ocurre con el DNA plasmídico una vez dentro de la célula?
Es duplicado por las enzimas DNApol de la bacteria y los plásmidos duplicados son separados al azar en la división celular siguiente generando dos bacterias nuevas que contienen el plásmido además de los productos de la expresión genética de estos.
4. ¿Cómo caracterizaron Avery, MacLeod y McCarthy al principio transformante? ¿A
qué conclusión llegaron?
Realizaron cuatro experimentos como el de Griffith en los que los producto de la lisis de bacterias que generan enfermedad fueron tratados con proteasas, lipasas, glucosidasas y nucleasas en cada caso y observaron que en los primeros tres casos las bacterias eran transformadas y mataban a los ratones al ser inyectadas mientras que en el caso de las tratadas con nucleasas las bacterias no eran transformadas y permanecen en su estado natural de no infectar a los ratones.
5. ¿Por qué se extienden las bacterias transformadas sobre una placa de Petri con
medio LB sólido en vez de inocular un tubo con medio LB líquido?
Para poder visualizar las colonias que fueron formadas es necesario darle una base de apoyo, en cambio en medio líquido las bacterias estarían en suspensión y no formando colonias observables.
6. Se transforma una cepa sensible a la ampicilina con 1.5 microgramos de un plásmido que
porta resistencia a dicho antibiótico, con un inserto que corresponde a la zona
promotora del gen de la insulina humana. Luego de incubar toda la noche las placas
de Petri con medio sólido con ampicilina a 37°C se cuentan 200 colonias.
a) Calcule la eficiencia de transformación;
número de unidades formadoras de colonias (UFC) / microgramos de plásmido =
200 UFC / 1.5 microgramos = 133
eficiencia de transformación = 133
b) ¿Por qué es útil utilizar un plásmido que porta el gen de resistencia a la ampicilina?
Para poder visualizar la eficiencia de transformación del plásmido insertado contando las unidades formadoras de colonias.
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