Técnica de tinción de Gram en bacterias

...

En las papas, el tipo de bacteria responsables de su descomposición en estado de almacenamiento es la erwinia.

Los pasos que se aplicaron en la práctica de laboratorio fueron las siguientes:

Preparación de la lámina: en este proceso, se tuvo que tomar las papas, cortar con el bisturí una porción pequeña de la parte podrida y colocarlo a la lámina, luego extenderlo de manera que la muestra quede delgada y por ultimo fijarla utilizando calor, aunque este último no se aplicó debido al mal funcionamiento del mechero.

Técnica de tinción de Gram: Luego colocada la muestra en el portaobjetos, se prosigue a colocar el portaobjetos en una caja con el puente que sostenga el portaobjetos para realizar la tinción.

Primero se añade el azul de metileno que actúa como colorante primario y se le deja por un minuto, pasado el minuto se le agrega agua destilada para lavar el exceso. En ésta parte se puede notar que la muestra retuvo el color azul por lo que se deduce que la colonia de bacteria son Gram positivas porque retienen el color azul.

Luego se agrega lugol por un minuto, actuando como un mordiente, la reacción tomada por la muestra fue tornar su color un poco oscura. Después se agrega safranina y se deja por treinta segundos, la reacción que tomó la muestra fue de color violeta.

Por último, se agrega acetona o alcohol durante treinta segundos, en la que la reacción tomada fue el mismo color oscuro, es decir que retuvo el color azul y por lo tanto se concluye que la colonia de bacteria es Gram positiva.

Para proseguir con la observación se quita el exceso de agua y se seca, después se coloca el cubreobjetos y se coloca en el microscopio para su observación.

Resultados y discusión

Los resultados obtenidos fueron las reacciones que tuvo la muestra al momento de agregar un reactivo, como por ejemplo, el azul de metileno en la que la muestra tomó el color azul violeta, luego de aplicar el lugol, éste tomo un color más oscuro, y después con la safranina tomo un color más oscuro, y al momento de agregar la acetona, éste quedo azul violeta, es decir que las bacterias que estaban en la papa son clasificadas cómo Gram positivas debido a que retienen el color azul, vale destacar que si fueran Gram negativas, al final de la tinción, éstas tenían que ser de color anaranjado.

Durante la observación no se logró determinar ni identificar a las bacterias debido a que el color azul predominaba y no se podía determinar las estructuras de manera individual, vale recalcar que las erwinias, las bacterias anteriormente supuestas, no son posibles de que se encontraran en la muestra de papa, ya que éste tomo una coloración azul en casi toda su estructura, y las erwinias pertenecen a la Gram negativas por lo que en teoría, al observar las muestra, ésta tenía que ser de color anaranjado.

Lo que se logró observar eran estructuras redondeadas y otras alargadas, lo que se supone que eran otro tipo de bacterias, ya que la muestra estaba en pudrición.

Conclusiones

Se concluye que la tinción de Gram es una técnica de tinción en la que permite clasificar básicamente a las bacterias, además que nos permite tener mejor visualización de las estructuras y morfología de las bacterias. El procedimiento de la tinción de Gram se debe hacer de acuerdo a los pasos y cumplir con los tiempos y la forma de manipulación de la muestra con el fin de no tener dificultades en la observación. El tipo de bacteria detectadas son Gram positivas debido a que la muestra retuvo el color azul, y las estructuras vistas eran redondas (cocos) y alargadas (bacilos). Es importante aplicar la tinción de Gram para obtener información básica de las bacterias y poder visualizar mejor sus estructuras.

Bibliografía

Gutiérrez y Vizcarrondo (2008). Guía de laboratorio: Morfología y tinción de los microorganismos.

[pic 2]

Anexo 1

Galería de imágenes

[pic 3]

Vista microscópica de muestra de papa, con bacterias Gram positivas.