AISLAMIENTO E. COLI EN MUESTRA DE

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- El antígeno somático O, proveniente del lipopolisacárido de la pared celular;

- El antígeno flagelar H, compuesto por 75 polisacáridos.

El grupo de riesgo comprende prácticamente a todas las personas, inmunocompetentes o no. Los niños menores de 5 años de edad con problemas de alimentación, así como los ancianos son los más susceptibles de sufrir complicaciones graves. La Escherichia coli puede causar infecciones intestinales y extra intestinales generalmente graves, tales como infecciones del aparato excretor, vías urinarias, cistitis, Uretritis, meningitis, peritonitis,mastitis, septicemia y neumonía Gram-negativa. La Escherichia coli está dividida por sus propiedades virulentas, pudiendo causar diarrea en humanos y otros animales. Otras cepas causan diarreas hemorrágicas por virtud de su agresividad, patogenicidad y toxicidad. En muchos países ya hubo casos de muerte por esta bacteria. Generalmente le pasa a niños entre 1 año y 8 años. Causado generalmente por la contaminación de alimentos, y posterior mala cocción de los mismos, es decir, a temperaturas internas y externas menores de 70 °C, por esto se considera como indicador de contaminación fecal.

Se distinguen seis cepas según su capacidad patógena, también se les puede llamar virotipos:

Escherichia coli enteropatogénica (ECEP), enterotoxigénica (ECET), enteroinvasiva (ECEI), enterohemorrágica (ECEH), enteroagregativa (ECEA) y de adherencia difusa (ECAD).

Para el aislamiento y para la caracterización de colonias presuntivas de Coliformes totales y fecales, se utiliza tres medio de cultivo (EMB, Hecktoen, Chromocult). Posteriormente se siembra por agotamiento Agar Nutritivo. Y para la respectiva identificación de Coliformes fecales, se realizan una serie de pruebas bioquímicas (Tinción de Gram, Catalasa, Oxidasa, TSI, LIA, CIT, SIM, NIT).

PROCEDIMIENTO

1. Diluciones:

- Se prepararon diluciones consecutivas 10-1 y 10-2 en agua destilada esterilizada a partir de la muestra. (Pescado)

2. Siembra en medios selectivos y diferenciales:

- Se sembró por agotamiento en cajas con medios selectivos (EMB, Hektoen y Chromocult) y se incubaron a 37°C/48h.

- Se aislaron dos presuntivas en agar nutritivo y se incubaron a 37°C/24h.

4. Confirmación bioquímica:

- Se tomó de cada caja colonias típicas de Salmonella spp y se sembró por punción y estría sobre la superficie de tubos con agar TSI LIA, SIM, y AN 0,6%.

CONFIRMACIÓN BIOQUÍMICA

Partiendo del crecimiento obtenido en agar nutritivo se realizaron las siguientes pruebas:

- Coloración de Gram.

- Prueba de Catalasa.

- Prueba de Oxidasa.

- Se sembró por punción y estría en los tubos con agar TSI, SIM, LIA, CIT, NIT y se incubó a 37ºC/24h.

RESULTADOS

DILUCIONES

10-2

10-2

10-2

AGAR

EMB

Hecktoen

Chromocult

Coliformes totales y fecales

crecimiento

crecimiento

crecimiento

- A partir de la muestra de pescado, se aisló el organismo, y posteriormente para la caracterización de colonias presuntivas se sembró en medios de cultivo EMB, Hecktoen y Chromocult. Se parte del crecimiento en Chromocult para la identificación de Coliformes fecales.

Tabla Nº 1. Identificación de colonias presuntivas para Coliformes totales.

Agar

Forma

Borde

Tamaño

Elevación

Color

Halo

EMB

Circulares

Entero

Mediano

Convexa

Violetas

Blanco

Hecktoen

Circulares

Entero

Mediano

Convexa

Naranjas

Chromo-

cult

Circulares

Entero

Mediano

Convexa

Rojas

Tabla Nº 2. Identificación de colonias presuntivas para Coliformes fecales.

Agar

Forma

Borde

Tamaño

Elevación

Color

Halo

EMB

Circulares

Entero

Mediano

Convexa

Violetas con brillo verde

Blanco

Hecktoen

Circulares

Entero