Aisalimiento de DNA plasmídico
Enviado por Helena • 19 de Febrero de 2018 • 1.062 Palabras (5 Páginas) • 404 Visitas
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el DNA plasmídico precipite. Se centrifugo y se desecho sobrenadante.
El precipitado se re suspendió en Regulador tris-EDTA, suavemente con la micropipeta, este regulador protege al ADN de la degradación enzimática. Se coloco la muestra en un pozo, en la placa de gel de agarosa, anteriormente se le adiciono el colorante azul de bromofenol, ya que nuestra muestra es incolora, con este colorante podemos saber que avance está teniendo nuestra electroforesis. Se comenzó con la electroforesis a 80Volts durante aproximadamente 30 minutos. Al terminar la electroforesis se revelo con bromuro de etidio, se elimino exceso de agua bidestilada y se incidió luz ultravioleta sobre la placa, revelando así las migraciones de un color rosa.
RESULTADOS
Nuestro pozo fue el número 2 y también analizaremos el pozo 3. Los pozos son hiendo de izquierda a derecha.
En el pozo 2 se obtuvieron 3 bandas donde la principal fue de la forma lineal y de las formas superenrollada y relajada fue menor, ya que las bandas son más tenues.
En el pozo 3 se obtuvo principalmente la banda correspondiente a la forma lineal y las otras dos bandas son casi desapercibidas, es decir no había demasiado DNA en estas formas, relajada y superenrollada
En ambos pozos se ve una mancha hacia el final de la placa esto es RNA, la cual no se elimino cuando se agrego la solución I.
DISCUSIONES
Las bandas observadas en el gel de agarosa dependieron del tamaño del DNA aislado, ya que los más pequeños migraron más rápido que los grandes. Debido a que nuestro DNA es circular este podría estar superenrollado y/o relajado, por otra parte si durante la técnica se rompieron las cadenas obtendríamos una banda más, correspondiente a una forma lineal. Entonces tendríamos que el superenrollado migra más rápido que el relajado y la forma lineal, pero esta última migra más rápido que la forma relajada. Esto se puede explicar debido a que la agarosa tiene poros donde la forma superenrollada por estar muy compacta es fácil que pase entre estos poros, mientras que la forma lineal a pesar que es más grande pero delgada y es más fácil que pase, la forma relajada es voluminosa haciendo que su migración sea con menor velocidad. Con esta información podríamos obtener 3 bandas, la primera de la forma relajada, como segunda la forma lineal y en tercera la forma superenrollada.
Las manchas hacia el final de la placa es RNA, esto se debe a que en la solución I, no estaba presente la RNasa A, quien iba a degradar el RNA. No se observo manchas en los pozos por lo que deducimos que no había restos de ADN plasmídico en la muestra.
CONCLUSIONES
El DNA plasmídico puede ser aislado.
Para el asilamiento del DNA plasmídico se usan soluciones con objetivos específicos.
La comprobación del aislamiento de DNA plasmídico se realiza mediante la electroforesis.
La electroforesis nos separa las formas en que se encuentra el DNA plasmídico, superenrollada, relajada y lineal.
Se usa un colorante y un revelador debido a que nuestra muestra es incolora.
BIBLIOGRAFÍA
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