DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA G E N É T I C A M I C R O B I A N A AISLAMIENTO DE DNA.

...

Tabla No. 2 Concentración de DNA cromosomal de E. coli W3350 (en µg/ml)

Eq

[pic 4]

1 unidad de As 260mm=50µg/ml de DNA

1

436

490.5

2

392.2

441.3

3

431.66

485.9

4

502

565

5

598

673.2

6

527.51

593.45

Calculo para concentración de DNA:

- 1er Método = g/mL[pic 5][pic 6]

Dónde:

Ae=Índice de Absorción especifica (22500 para el DNA)

b=paso de luz de la celda en centímetros

Para convertir g/ml a µg/mL multiplicar por [pic 7]

Por lo tanto= 502 µg/mL de DNA

- 2do Método

1 unidad de A 260nm=50µg/ml de DNA por lo tanto…

11.30 de A 260nm= 565µg/ml de DNA

Tabla No. 3 Pureza de DNA cromosomal de E. coli W3350 (en µg/ml)

Eq

A260/A280

A260/A230

1

1.95

2.39

2

1.95

2.45

3

1.95

2.05

4

1.91

2.26

5

1.98

2.41

6

1.96

2.43

Calculo para la pureza del de DNA:

- 1er Método = [pic 8][pic 9]

- 2do Método

= [pic 10][pic 11]

Tabla No. 4 Absorbancia del DNA cromosomal de E.coli W3350 a diferentes longitudes de onda.

ABSORBANCIA

Λ

Eq1

Eq2

Eq3

Eq4

Eq5

Eq6

230

4.1

3.59

4.76

4.98

5.573

4.897

240

6.33

5.94

6.47

7.413

8.72

8.037

250

9.25

8.77

9.77

10.692

12.921

11.626

260

9.81

8.826

9.78

11.30

13.464

11.869

270

7.63

6.926

7.65

9.116

10.658

9.39

280

5.01

4.523

5.614

5.89

6.798

6.03

290

2.185

1.971

2.15

2.50

2.898

2.64

300

0.462

0.424

0.37

0.59

0.599

0.616

[pic 12][pic 13][pic 14]

Figura 1. Espectro de absorción de DNA cromosómico de E.coli W3350

B. RESULTADOS DE DNAMAN.

- Influencia del contenido