Aplicaciones de la citologia exfoliativa en el diagnostico del cancer oral

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Cowpe et al.(14) encontraron que la disminución del área del citoplasma (AC) precede a un aumento del área del núcleo (AN) en los tejidos que sufren transformación maligna. Además, sugieren que debido a la ausencia de una base de valores citométricos normales, la mucosa sana del mismo paciente proporciona un control satisfactorio. Ramaesh T et al.(15) aplican técnicas citométricas para determinar los diámetros del núcleo y del citoplasma de células de la mucosa oral normal, de lesiones displásicas y de carcinoma de células escamosas. Encuentran que el diámetro del citoplasma se reduce a partir de las células de la mucosa normal hacia las lesiones con mayor grado de displasia, hasta adquirir su menor tamaño en las lesiones de carcinoma de células escamosas. En relación al diámetro del núcleo, encuentran que éste va aumentando a partir de las células normales hacia las células de lesiones con mayor grado de displasia adquiriendo su mayor diámetro en las células de las lesiones de carcinoma oral.

Estos estudios demuestran el valor de la citología exfoliativa en el seguimiento de lesiones clínicamente sospechosas, proporcionando un excelente test diagnóstico adicional para detectar lesiones malignas iniciales, y que la reducción del núcleo y el aumento del citoplasma pueden ser indicaciones precoces del cambio maligno.

-Contenido de ADN nuclear

La citometría estática permite la cuantificación del contenido de ADN en células obtenidas por citología exfoliativa, sin embargo, para el análisis del contenido de ADN, la tinción de rutina con Hematoxilina- Eosina es inadecuada, por lo que se necesitan tinciones especiales para asegurarse que la cantidad de ADN es proporcional a la cantidad de tinción. La Reacción de Feulgen completa estos criterios, ya que es un procedimiento de tinción con carácter estequiométrico (es decir, cada molécula fijada de reactivo de Schiff se corresponde con una porción constante y equivalente de molécula de ADN), lo que permite conocer la cantidad de ADN que contienen las diferentes células que componen la muestra. La gran ventaja del procedimiento es que sobre él puede realizarse la objetivación de esta información mediante espectrofotometría o técnicas de análisis digital de imágenes por densitometría de ADN (16).

Cowpe et al.(11) han demostrado que la mucosa clínicamente normal en pacientes sanos muestra un perfil de ADN diploide, mientras un perfil anormal de ADN se asocia con enfermedades malignas (17). Sin embargo, aunque la mayoría de las lesiones malignas orales presentan unos perfiles anormales de ADN, algunas pueden ser diploides (18,19).

La combinación de la cuantificación del contenido de ADN con la morfometría celular y nuclear, parece ser más discriminatoria a la hora de distinguir lesiones premalignas y malignas. Remmerbach et al., (20) en un estudio prospectivo sobre el valor diagnóstico de la citología exfoliativa en el diagnóstico precoz del cáncer oral, analizaron la citometría celular y del ADN en lesiones sospechosas de cáncer. Encontraron una sensibilidad de 98,2%, y una especificidad de 100% al combinar ambas técnicas. Concluyen que la citometría del ADN es una herramienta sensible, específica y objetiva para la identificación precoz de células neoplásicas en el frotis oral.

Ogden et al. (21) demuestran también su aplicación en el seguimiento de lesiones malignas después del tratamiento definitivo y en la detección de recurrencias tumorales.

Recientemente, Sudbo et al. (22) demostraron, en cortes histológicos, que el contenido de ADN tiene valor pronóstico en leucoplasias de la cavidad oral. La tasa de malignización para las lesiones diploides, tetraploides y aneuploides fue de 3%, 60% y 84%, respectivamente. Doseva et al.(23) encontraron, en el frotis de leucoplasias y líquenes que posteriormente sufrieron degeneración maligna, una distribución hipodiploide o hipertetraploide en vez de un patrón de ADN diploide.

Schimming et al. (24) valoraron la correlación entre la distribución de ADN y las características clínico-patológicas del carcinoma de células escamosas de la cavidad oral. Encontraron un estadio (N) significativamente más alto, una mayor frecuencia de metástasis y una menor tasa de supervivencia en los tumores no-diploides.

Así, la cuantificación del ADN nuclear podría ser útil para predecir el comportamiento de lesiones potencialmente malignas, establecer un pronóstico en lesiones malignas y detectar recurrencias post-tratamiento.

-Identificación de marcadores tumorales mediante inmunohisto-química

La identificación de la expresión de marcadores tumorales en células exfoliadas de la cavidad oral ha recibido un especial interés. Entre ellos la expresión de citoqueratinas ha sido motivo de diversos estudios. El patrón de expresión de las citoqueratinas proporciona información útil con respecto al estado de diferenciación celular (25), pero su potencial diagnóstico en la detección precoz del cáncer oral es limitado una vez que no hay un marcador de queratina presente en todas las lesiones malignas y que no esté presente en la mucosa oral normal (26).

Sin embargo, la identificación de algunas citoqueratinas, ej. K8 y K19 (27), puede representar un importante indicador de una lesión maligna, particularmente si está asociada con otros marcadores, como por ejemplo el perfil de ADN (28).

La mutación del gen supresor de tumor p53 es uno de los cambios genómicos más frecuentes en el cáncer humano (29). De acuerdo con la mayoría de los estudios la p53 no es detectada en la mucosa oral normal (30-33), pero puede ser demostrada a través de técnicas inmunohistoquímicas en el carcinoma de células escamosas y lesiones potencialmente malignas de la mucosa oral (34). De la misma forma ha sido identificada en células de tumores malignos, obtenidas por citología exfoliativa, pero no en mucosa normal (35).

Sin embargo, la demostración inmunohistoquímica de la proteína p53 no se puede asumir como un marcador absoluto de mutaciones del gen p53, puesto que ésta puede ser resultado de la estabilización de la proteína p53 salvaje (no mutada) (36). Además, la mutación del p53 está presente sólo en aproximadamente el 50% de los carcinomas de células escamosas de la cavidad oral, lo que añadiendo al hecho de que la expresión de p53 en tumores orales se ve en etapas avanzadas de la carcinogénesis (37) la citología exfoliativa no es capaz de promover la detección precoz basándose en la detección de la p53, dado que esta técnica es inapropiada para obtener muestras de células basales a partir del epitelio