BACTERIAS RECOMBINANTES

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- Transposición.

Este proceso consta de pequeños segmentos genéticos que no son de replicón y se llaman trasposones se desplazan de un sitio a otro sobre un mismo genoma o de un replicón a otro (ejem. De un plásmido a un cromosoma). Los trasposones, conocidos también como elementos de transposición o elementos Tn, son segmentos de cadena doble ADN que no pueden replicarse a menos que se encuentre dentro de un replicón. Uno de los motivos por lo que los transposones son importantes es que los genes que codifican las características de virulencia y los genes que codifican la resistencia a fármacos a menudo se transportan sobre transposones. Se han descrito 3 tipos: Secuencias de inserción, transposones compuestos y transposones Tn o tipo A.

- Secuencia de inserción o elementos Si.

Fueron descubiertos como segmentos “novedosos” que inactivaban al operón Gal de E.coli. Su tamaño es de 700 a 150pb, llevan un solo gen (para una enzima trasposasa) y presentan secuencias invertidas y cortas de nucleótidos complementarios en cada extremo. Por ello, cuando la secuencia de inserción se disocia, forman estructuras singulares de tallo y ciclo observable con microscopio electrónico.

- Transpones compuestos.

Miden de 2000 a 40000pb, llevan varios genes y tienen una secuencia de inserción sobre cada extremo. Los transposones compuestos son los que mayor frecuencia se relacionan con genes virulentos o resistencia a los antibióticos.

- Transposones Tn o tipo A.

No tiene secuencia de inserción en los extremos, pero presentan secuencias terminales cortas, invertidas y repetidas. Estos transposones codifican una trasposasa, una resolvasa y diversos genes auxiliares.

*La recombinación por transposición no es un tipo de recombinación generalizada y no incluye la actividad de la proteína RecA.

- Expresión de la información genética de las bacterias: regulación.

*Comparación entre la transcripción en células bacterianas y células eucariotas.

Se considera que el cromosoma es una serie de genes sobre de dos cadenas de DNA, una de las cuales es anti complementaria de la otra. Por tanto, al parecer una cadena contiene la información genética y se lee para sintetizar ARN, mientras que la otra cadena sirve como complemento estructural a la cadena patrón. Cada cadena contiene genes susceptibles de leerse, algunos de ellos se superponen y la lectura de genes es controlada por promotores que se encuentran a lo largo de la cadena del cromosoma.

Las células eucariotas utilizan diversas polimerasas de RNA dependientes el DNA para sintetizar RNA. Una bacteria que tenga una sola polimerasa de RNA con actividad regida por su vinculación con su factor de iniciación (factor sigma), se verá influida por una gran variedad de proteínas de control de trascripción. Cada polimerasa de RNA consta de dos cadenas alfa una cadena beta, una beta prima y el facto sigma. En consecuencia la enzima interna por a b prima y al agregarse sigma se completa el complejo Holo enzimático de la polimerasa de RNA. Las bacterias sintetizan factores sigma únicos para reconocer y transcribir conjuntos específicos de o perones.

- Métodos de recombinación bacteriana.

- Transformación.

La transformación es el consumo de DNA desnudo por la bacteria. El DNA se transfiere durante la conjugación no puede degradarse agregando DNAasa al medio de suspensión por que este DNA nunca se encuentra fuera de una célula. El DNA que se consume durante la transformación es sensible DNAasa por que el DNA procede del medio ambiente. El DNA trasformado se origina a partir de la lisis de bacterias y el fragmento que se consume es pequeño. Y consta de 5-20 genes.

- Transducción.

Las bacterias obtienen nuevos genes cuando los bacteriófagos les inyectan DNA que incluye uno o más genes bacterianos. Hay dos procesos de transducción:

Generalizada y especializada.

- Transducción Generalizada.

Es un proceso por el cual los genes bacterianos se introducen en forma aleatoria a otra bacteria mediante un bacteriófago. La transducción se realiza mediante un fago lisogeno o un fago lítico.

*Fago lisogeno: Estos insertan su DNA de forma aleatoria en el cromosoma bacteriano.

*Fagos líticos: Fragmentan del DNA del huésped durante el ciclo de infección.

- Transducción especializada.

Algunos fagos lisogenos tienen un sitio de inserción discreto y único en el cromosoma bacteriano, el fago lambda siempre inserta entre el gen Gal y el gen Bio, a un que es posible que haya genes intermedios entre los dos mencionados. Cuando la señal para cambio de lisogenecidad a siclo lítico ocurre el fago lambda se desprende.

- Conjugación.

Es un método por el cual se trasmite de manera directa DNA de una bacteria a otra a través de un puente conjugado. Algunos piensan que el puente es el pilus sexual o también es la proteína trad. Las bacterias no se aparean en realidad, ni forman cigotos o experimentan meiosis.

- Conjugación que produce la transferencia de genes de plásmido.

La conjugación se produce cuando bacterias de dos tipos que se aparean se encuentran y se conectan mediante un puente conjugado (pilus sexual) La bacteria donadora se designa como fértil y la receptora como no fértil.

- Cuando las bacterias se conjugan, hay una transferencia unilateral de DNA procedente de la bacteria donadora en este caso la fértil a la receptora no fértil. Los genes siempre se transmiten a la misma velocidad y en el mismo orden.

- Cuando una bacteria fértil se aparea con una bacteria no fértil se transfiere una copia del plásmido F a la receptora, pero la bacteria fértil retiene una copia de dicho plásmido. De este modo, al aparearse F con no F se obtendrá dos bacterias fértiles.

- Conjugación que produce transferencia de genes cromosómicos.

En este tipo de conjugación la célula donadora se llama célula de recombinación de alta frecuencia o célula Hfr.

Cuando