Calculo de la Actividad enzimática de la Ureasa Oscar Javier Montiel1*, Dagoberto Ortiz Ome1*, Mateo Bolaños1*
Enviado por Rebecca • 24 de Agosto de 2018 • 2.651 Palabras (11 Páginas) • 426 Visitas
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Esta operación se realizó para todos los experimentos.
Desnaturalización de la enzima por temperatura.
En tres tubos de ensayo se puso 1 mL de extracto de Ureasa y se calentó a baño maría por 2 minutos a 60 y 90 °C por 2 minutos.
Desnaturalización de la enzima por cambio de pH.
En un vaso de precipitado se tomó 10 mL de solución de urea 1% lleve a pH 10 adicionó NaOH, verificando el cambio de pH con el pHmetro.
∙ Se utilizó esta solución para la determinación de la actividad de ureasa según el numeral 4.
∙ En un vaso de precipitado se 10 mL de solución de urea 1% y se llevó a pH 4 adicionando ácido fosfórico, verificando el cambio de pH con el pHmetro.
Ensayo de especificidad de la enzima.
♣ Se realizó la medida de la actividad de ureasa según el numeral 4 pero utilizando como sustrato la solución de tiourea.
Resultados
Tabla 1: Datos de absorbancia de la actividad enzimática de la Ureasa 1.
tiempo (s)
Abs
activity
V de rxn
0
1,8849
0
Abs/t
1
1,9429
0,058
1,9429
2
2,0052
0,0622
1,0026
3
2,0652
0,06
0,6884
4
2,123
0,0578
0,53075
5
2,183
0,06
0,4366
6
2,2408
0,0578
0,37346667
7
2,2972
0,0564
0,32817143
8
2,3504
0,0532
0,2938
9
2,4026
0,0522
0,26695556
10
2,4524
0,0498
0,24524
11
2,5032
0,0508
0,22756364
Tabla 2: Concentración y velocidad de reacción
Moles = 0.1666 mol/L
Epsilon rojo Fenol= 0,94 M-1cm-1
[pic 2]
Grafica 1: Absorbancia Vs tiempo, Velocidad de reacción Vs tiempo, Actividad enzimática Vs tiempo.
[pic 3]
Tabla 3: Ajuste de mínimos cuadrados.
pendiente
0,05655594
0,02442626
0,05548951
-0,01906707
0,0542965
-0,0219746
0,05293357
-0,02559274
Tabla 4: Datos actividad enzimática enzima preparada. Absorbancia Vs Tiempo.
Time
Abs
0
0,948
1,002
0,9716
2,004
1,0011
3,006
1,0219
4,008
1,044
5,01
1,0667
6,012
1,0922
7,014
1,1145
8,016
1,1386
9,018
1,1651
10,02
1,1911
11,022
1,2164
12,024
1,2412
13,026
1,2662
14,028
1,292
15,03
1,3177
16,032
1,3435
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