Calculo de la Actividad enzimática de la Ureasa Oscar Javier Montiel1*, Dagoberto Ortiz Ome1*, Mateo Bolaños1*

...

Esta operación se realizó para todos los experimentos.

Desnaturalización de la enzima por temperatura.

En tres tubos de ensayo se puso 1 mL de extracto de Ureasa y se calentó a baño maría por 2 minutos a 60 y 90 °C por 2 minutos.

Desnaturalización de la enzima por cambio de pH.

En un vaso de precipitado se tomó 10 mL de solución de urea 1% lleve a pH 10 adicionó NaOH, verificando el cambio de pH con el pHmetro.

∙ Se utilizó esta solución para la determinación de la actividad de ureasa según el numeral 4.

∙ En un vaso de precipitado se 10 mL de solución de urea 1% y se llevó a pH 4 adicionando ácido fosfórico, verificando el cambio de pH con el pHmetro.

Ensayo de especificidad de la enzima.

♣ Se realizó la medida de la actividad de ureasa según el numeral 4 pero utilizando como sustrato la solución de tiourea.

Resultados

Tabla 1: Datos de absorbancia de la actividad enzimática de la Ureasa 1.

tiempo (s)

Abs

activity

V de rxn

0

1,8849

0

Abs/t

1

1,9429

0,058

1,9429

2

2,0052

0,0622

1,0026

3

2,0652

0,06

0,6884

4

2,123

0,0578

0,53075

5

2,183

0,06

0,4366

6

2,2408

0,0578

0,37346667

7

2,2972

0,0564

0,32817143

8

2,3504

0,0532

0,2938

9

2,4026

0,0522

0,26695556

10

2,4524

0,0498

0,24524

11

2,5032

0,0508

0,22756364

Tabla 2: Concentración y velocidad de reacción

Moles = 0.1666 mol/L

Epsilon rojo Fenol= 0,94 M-1cm-1

[pic 2]

Grafica 1: Absorbancia Vs tiempo, Velocidad de reacción Vs tiempo, Actividad enzimática Vs tiempo.

[pic 3]

Tabla 3: Ajuste de mínimos cuadrados.

pendiente

0,05655594

0,02442626

0,05548951

-0,01906707

0,0542965

-0,0219746

0,05293357

-0,02559274

Tabla 4: Datos actividad enzimática enzima preparada. Absorbancia Vs Tiempo.

Time

Abs

0

0,948

1,002

0,9716

2,004

1,0011

3,006

1,0219

4,008

1,044

5,01

1,0667

6,012

1,0922

7,014

1,1145

8,016

1,1386

9,018

1,1651

10,02

1,1911

11,022

1,2164

12,024

1,2412

13,026

1,2662

14,028

1,292

15,03

1,3177

16,032

1,3435

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