DESARROLLO DE PRÁCTICAS BÁSICAS Y ANÁLISIS DE IDENTIFICACIÓN

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Para el procedimiento se tomó la muestra obtenida del baño de hombres (MBH), se tomó 1ml de la misma y se depositó en el tubo de ensayo referenciado con -2, luego del tubo de -2 se tomó 1ml y se depositó en -3 y finalmente del tubo de -3 al de -4. Este proceso se realiza con el fin de hacer diluciones y posteriormente tener la facilidad de contar las UFC (unidades formadores de colonia). Los tubos mencionados y que estaban marcados con las etiquetas -2, -3 y -4 contenían medio de cultivo agua de peptona.

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Figura 1. Medición del medio.

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Figura 2. Medio liquido preparado.

- Proceso para el medio solido (agar)

Para la preparación de éste medio se tomaron 2,3 gr de medio marca Merck KGaA y se diluyeron en 100ml de agua destilada, no se homogenizó. Se tapó con papel aluminio la boquilla del matraz que contenía el medio junto con el agua destilada. Luego de llevó el recipiente a autoclave durante 121°C durante 15 o 20 min, después de observar el cambio en la cinta de autoclave se retiró y se dejó atemperar a entre 45 y 50 °C. Posteriormente se vació el medio en cajas de Petri. Luego se toma el medio líquido con las diluciones seriadas, se vertió 1ml de la dilución de -2 en caja de Petri y lo mismo con la dilución de -4.

Se introduce el agar sobre la caja de Petri respectiva para -2 y -4 hasta cubrir y se agita. Con la caja de Petri de -4 se repite el procedimiento para hacer siembra en doble capa. En las 2 cajas de Petri que no tenían muestra se introduce el medio de agar, se esperan unos minutos a que se presente la solidificación y cubrimos con papel de cocina transparente.

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Figura 3. Medición del medio.

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Figura 4. Medio solido preparado previo a ser sellado.

- Técnicas de Siembra de Microorganismos

Se realizaron diluciones seriadas hasta de orden 104 unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml) a partir de una solución madre para realizar cada una de las técnicas de siembra de microorganismos.

- Siembra profundidad (S.P.): Se adiciona 0,1 ml de la muestra del tubo -2 más el medio de cultivo PC a una placa que contenga el medio de cultivo sólido, se homogeniza la suspensión con movimientos horarios y antihorario para finalmente poder incubar y observar a un tiempo optimo el crecimiento microbiano.

- Siembra triple estría (T.E): Se vierte medio de cultivo PC hasta cubrir la superficie interna de la caja de Petri. El asa se calienta al rojo vivo para esterilizar. Se extrae 0,1 ml de la muestra del tubo -2 y se aplica en la superficie del medio de cultivo endurecido. Con el asa se divide la muestra en 2 mitades y se esparce por la superficie de la primera mitad. Se flamea el asa para esterilizar y se divide en mitades la mitad restante. La muestra se esparce en uno de los cuartos de la superficie. Se esteriliza el asa nuevamente y se esparce la muestra en el cuarto de superficie restante. Se deja incubar para observar posteriormente el crecimiento microbiano.

- Siembra doble capa (S.D.C.): Se adiciona una capa del medio de cultivo PC hasta cubrir la superficie de la caja de Petri. Se deja endurecer y se añade 0,1 ml del tubo -4 y se vuelve a cubrir con otra capa de medio de cultivo PC hasta sellar completamente la superficie de la muestra. Se deja incubar para observar posteriormente el crecimiento microbiano.

- Siembra por masa (S.M.): Se adiciona una capa del medio de cultivo PC hasta cubrir la superficie de la caja de Petri. Se añade 0,1 ml de la muestra del tubo de ensayo -2 y se extiende homogéneamente con el asa de platino para incubar y observar posteriormente el crecimiento microbiano.

- Tinción de GRAM

Se toma un portaobjetos delimitando la zona de estudio para cada muestra (hombre y siembra Triple Estría). Se agrega a cada zona una gota de agua destilada para extender y fijar las muestras con el asa previamente esterilizada; luego se tiñe durante un minuto con violeta de genciana y sin lavar se remplaza el colorante por el reactivo del lugol, lo cual arrastra el primer colorante y se deja actuar durante 1 minuto, es necesario lavar con agua y alcohol durante treinta segundos para teñir con fuchsina básica durante 3 minutos; finalmente se lava, seca y observa al microscopio.

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Figura 5. Cultivos seleccionados.

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Figura 6. Portaobjetos sobre vaso de precipitado.

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Figura 7. Tinción

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Figura 8. Observación al microscopio.

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Figura 9. Muestra vista a través del microscopio con el aumento 100X.

- Resultados y discusión

Las condiciones de trabajo en el laboratorio utilizado para microbiología no son las ideales, puesto que es un laboratorio de procesos agroindustriales que carece de muchos elementos básicos para llevar a cabo un proceso con todas las normas de seguridad establecidas, entre las cuales algunas son: monitorear el flujo de aire en el laboratorio, usar campanas para gases y vapores nocivos, no exponer las áreas a las muestras, descontaminar las áreas de trabajo diariamente, tener equipo de protección especial, tener contenedores especiales para materiales contaminados, tener superficies antiresbalantes y los puestos diseñados ergonómicamente.

- Preparación del medio

El medio solido realizado cumplió con las necesidades que se esperaban para desarrollar plenamente los requerimientos especificados para realizar unas siembras de cultivos bien elaboradas. Esta se solidificó como se esperaba, dando lugar a unas siembras bien realizadas sin contratiempo alguno ni con inconvenientes de otro tipo.

- Tinción de GRAM

En la observación de los microorganismos en el microscopio se presentaron formaciones de cocos. Estos se pudieron observar debido a su tinción rosa característica de las bacterias GRAM negativas