En el laboratorio se utiliza diversos métodos, primeramente necesitamos conocer que método se contextualiza como el camino utilizado para lograr una finalización

...

- Carga de las partículas

- Tipo de anticuerpos

- Concentración de electrólitos y viscosidad

- Determinación antigénicos

- Temperatura, concentración, agitación y tiempo de incubación

Por últimos en el proceso de aglutinación se presenta la inhibición de la aglutinación de los eritrocitos recubiertos con antígeno por el antígeno homologo es un método sensible y específico para la identificación de pequeñas cantidades de antígeno soluble en la sangre o en otros líquidos de los tejidos, por lo regular los anticuerpos en concentraciones relativamente bajas son incubados con una muestra de antígeno de cantidades conocidas. Es común utilizar métodos en la determinación HBs Ag en la hepatitis e identificación de antígeno de facto VIH y diferentes trastornos.

La técnica de ELISA es un ensayo inmunoenzimático ampliamente empleado en el área médica para la cuantificación de moléculas especialmente de aquellas que experimentan cambios en diferentes estados como pueden ser infecciones por bacterias, virus, hongos o parásitos o fases activas de enfermedades autoinmunes. Como ejemplo se pueden medir por ELISA hormonas, autoanticuerpos, inmunoglobulinas contra antígenos de patógenos, toxinas, antígenos. Las técnicas de ELISA son también muy usadas en los ensayos de nuevos medicamentos para comprobar sus efectos cuantificando las moléculas de interés en cada caso. Existen numerosas variantes de este tipo de ensayo. Entre ellos se encuentran los métodos directo e indirecto. El método directo permite la detección del antígeno con un anticuerpo específico conjugado con una enzima como sistema de marcaje. En el método indirecto el antígeno reacciona con el anticuerpo específico. El complejo antígeno-anticuerpo es entonces detectado por un segundo anticuerpo que reconoce dominios constantes de anticuerpos. Este anticuerpo, que suele ser específico de especie, es el que está marcado enzimáticamente. Esto permite que un mismo anticuerpo marcado sea capaz de detectar diferentes antígenos. En ambos métodos, la reacción enzimática puede ser detectada espectrofotográficamente con un lector ELISA.

El ELISA se basa en el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmune adsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.

Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuación:

Anticuerpos marcados:

• 8 ELISA Directo 8 ELISA Indirecto

• 8 ELISA sándwich

• Doble (DAS)

• Heterólogo (HADAS)

• Antígeno marcado 8 ELISA competitivo

La metodología de ELISA se clasifica en diferentes tipos que son:

- ELISA directo

- ELISA indirecto

- ELISA “Sándwich”

BIBLIOGRAFIA:

OSCAR E. MENESES VAZQUEZ /2006 / MANUAL DE INMUNIDAD/ MEXICO, TUXTLA GUTIERREZ, CHIAPAS, MEXICO /PAGINAS CONSULTADAS 97-109 / CONSULTADO MAYO 24 DE 2015

...