Extracción de ADN de células eucariotas (Alverjas) mediante método semi-convencional y análisis del resultado por electroforesis

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-Experiencia 1

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Al añadir el alcohol que es menos denso que el agua, el ADN que no es soluble en alcohol subirá hasta él y se tornará en forma de un conjunto de hilos Fig.2. Sin embargo no hay total seguridad de que lo que se logró aislar sea únicamente ADN.

-Experiencia 2

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El resultado que se obtuvo no fue el deseado, lo que se esperaba visualizar eran finas hebras de coloración azul oscuro que salieran de los posos del peine con tendencia al polo positivo. Sin embargo lo que se obtuvo fue una aglomeración que vendría a ser parte del Buffer de carga simplemente.

DICUSIÓN:

Lo que en la práctica se realizó se puede visualizar como que este requiere una serie de etapas básicas. Como primer punto la pared celular y la membrana plasmática deben romperse para tener acceso al núcleo de la célula esto se logró a utilizar la licuadora hasta licuando hasta las alberjas con agua y sal hasta formar una mezcla consistente, como anteriormente mencionamos en células eucariotas el ADN se ubica en el interior del núcleo (Planet Science, 2015). Lo que sigue es romper ahora la membrana nuclear para liberar el ADN contenido. La sal prepara a la molécula de ADN para que se precipite en la solución de alcohol porque forma un escudo alrededor de los extremos fosfato, los cuales presentan carga negativa. Los iones de sodio de la sal son atraídos por las cargas negativas del ADN, neutralizándolas. El detergente o jabón provoca la rotura de la membrana celular y emulsifica los lípidos y proteínas de la célula impidiendo las interacciones polares que mantienen la integridad de la membrana (Extracción de ADN eucariota, 2012). El detergente forma complejos con estos lípidos y proteínas causándoles precipitación. Mientras que la función del ablanda carnes que contiene una enzima proteolítica es ayudar a separar el ADN de las proteínas, histonas. Y por último se debe precipitar el ADN con alcohol para así evitar que enzimas degraden o aíslen ese ADN. El hielo disminuyó la tasa de degradación del ADN durante el proceso. El alcohol frio permite separar y reconocer el ADN ya que éste no es soluble en etanol frío (Extracción de ADN eucariota, 2012). Todos los componentes de la mezcla quedan en solución, excepto el ADN que al no ser soluble en etanol frío se separa, que es lo blanco que se logró ver en la muestra (Nelson C., 2012). Por otro lado esta sustancia blanca no es únicamente ADN, en realidad es un proceso para extraer ácidos nucleicos, mucho del ARN es cortado por ribonucleasas (enzimas que cortan ARN) las cuales son liberadas cuando la célula se rompe y abre completamente, por lo tanto lo que contiene la sustancia blanca es una mezcla de ADN y ARN.

Al someter esta posible aglomeración de ADN resultante de la experiencia uno a electroforesis no se logró observar ADN. Esto se debe a que el método de extracción empleado es casero y poco conveniente para un laboratorio de investigación.

Ya que no son proceso exacto como el uso de la licuadora por lo que cualquier variación por ejemplo de tiempo podría influenciar el resultado de la extracción.

CONCLUSION:

Se concluye que la hipótesis es correcta ya que tras varios procesos con el fin de liberar al ADN del núcleo, esto fue posible, sim embargo el material aislado no solo correspondía a ADN, este también pudo conter ARN. Aunque posiblemente se aisló ADN, en la experiencia dos no fue posible ver ese ADN empleando el método de electroforesis, debido a la naturaleza casera de la extracción.

CUESTIONARIO

¿Por qué sería complicado extraer DNA de células del tejido adiposo?

Porque un tejido adiposo posee una estructura lipídica que es hidrofóbica, esto va a hacer que desde el principio, cuando empleamos agua y sal el rompimiento de paredes celulares no se consiga un muestra fácil de manipular complicando los demás procedimientos.

¿La masa blanca que obtuviste es DNA puro o será una mezcla entre DNA y RNA?

Esta pregunta se contestó en la discusión, los que se obtiene es una mezcla de DNA y RNA debido a la enzima empleada.

BIBLIOGRAFIA

Alberts, B. (2010). Biología molecular de la célula (5th ed., pp. 195 - 200). Barcelona: Omega.

Extracción de ADN eucariota. (2012). http://www.geocities.ws/. Retrieved from http://www.geocities.ws/bio135a/Extrac_ADN.html

Extract DNA with stuff you have at home. (2012). Imagination Station. Retrieved from http://imaginationstationtoledo.org/content/2012/04/extract-dna-with-stuff-you-have-at-home/

Extract your own DNA. (2015). Experiments. Retrieved from http://www.planet-science.com/categories/experiments/biology/2012/03/extract-your-own-dna.aspx

University of UTAH,. (2016). DNA Extraction. Retrieved from http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/