FACULTAD DE CIENCIA Y TECNOLOGÍA

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TRATAMIENTO PRELIMINAR DE LA CAPACIDAD DE INTERCAMBIO DE UN INTERCAMBIADOR IÓNICO

Se utilizó columna empacada con Solución reguladora de Citratos pH 5.25 con ayuda de tubos de vidrio rotulados, se empezó el análisis cromatográfico agregando 1 ml de la mezcla de (prolina e histidina) lo más cerca de la superficie en la parte media superior de la columna abriendo la llave de la columna con un flujo regulado, se recolectó la primera fracciones de 1 ml agregando solución reguladora de Citratos pH 5.25 sin dejar que la columna se quedará sin FM, se recolectaron 14 fracciones más de 3 ml cada con solución reguladora de Citratos pH 5.25, al término se cambió la solución por Solución reguladora de citratos pH 2.0 llevando a cabo otras 15 fracciones más, finalmente se leyeron al espectrofotómetro a una absorbancia de 400 nm y 570 nm correspondientes a prolina e histidina.

SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN

Se identificaron 7 tubos de ensaye conforme al número de recolección consecutiva colectada, con ayuda de una pipeta Pasteur se introdujo una poción de lana de vidrio, se mezclaron 15 g de Alúmina alcalina a la cual se le adiciono 10 ml de agua hasta que se hidrato la Alúmina, con un soporte universal y unas micro pinzas se mantuvo la columna de vertical fija para empacar la Alúmina en la pipeta Pasteur y colectando el agua en un vaso de precipitados para finalmente, se ajustó a 15 y 20 gotas por minuto, se agregó 0.1 ml de la mezcla de colorantes en la parte central de la superficie de la columna y se inició la recolección de las fracciones de 1 ml por fracción adicionando por 1 ml de agua en la columna hasta que se observó el cambio de color se cambió el eluyente por etanol ácido y se continuó hasta que se observó la pérdida total de colores para finalizar se leyeron al espectrofotómetro para la lectura a 493 nm con agua como blanco de ajuste y 590 nm con etanol agua como blanco de ajuste.

SEPARACIÓN DE GRUPOS USANDO CROMATOGRAFÍA POR EXCLUSIÓN

Se usó una columna acondicionada con solución reguladora Tris-EDTA y un Gel Sephadex G-25 y un flujo de 12 a 16 gotas por minuto, se midió la altura del lecho cromatográfico y el diámetro del interior de la columna, se roturaron tubos suficientes con numeración consecutiva, se determinó el volumen de vacío (Vo) de la columna adicionando a la misma con una pipeta graduada 0.5 ml de Dextrana Azul 2000, enseguida colectar 15 fracciones hasta visualizar que el color el color Azul de la Dextrina desapareciera, se leyeron en el espectrofotómetro a 615 nm usando como blanco de ajuste el primer tubo de la colectado.

Se lavaron 25 tubos de 13x100 mm se secaron en una estufa de secado, una vez fríos se identificaron uno a uno y se pesaron para su uso posterior uno de los tubos se tomó como referencia de los 3 ml que se deberá colectar adicionando agua como ejemplo, se acondicionó la columna de Gel Sephadex G-25 con 100 ml de Tris-EDTA con una velocidad de flujo de 12 a 16 gotas por minuto, se adicionan 0.5 ml de la solución de albúmina al 1 % en sulfato de amonio colectando 25 fracciones de 3 ml cada una, se leyeron las muestras al espectrofotómetro a 280 nm usando como blanco de ajuste la primera fracción colectada se le añadió 1.5 ml de cloruro de bario 1M y se centrifugaron a 2000 rpm para la obtención del precipitado de sulfato de bario y desechando el sobrenadante, se pesaron nuevamente los tubos fraccionados se adiciono solución de TRis-EDTA y se leyeron al espectrofotómetro a 615 nm usando como blanco de ajuste el primer tubo colectado.

RESULTADOS

SEPARACION DE AMINOACIDOS DE JUGO DE FRUTAS POR CROMATOGRAFÍA BIDIMENSIONAL

Tabla 1. Cálculos de los Rf de la cromatoplaca bidimensional de la fruta problema (pera).

Fase I

Frente del disolvente

Frente del soluto

Rf

1

7.5

2.7

0.36 Lys

2

7.6

2.2

0.2894 Glu/Ala

3

7.6

0.1

0.0131----

4

7.5

1.5

0.2 Glu

Fase II

2

9

0.9

0.1 ----

3

9

7.3

0.811 ---

4

9

7.8

0.866 ----

Los aminoácidos que se pudieron identificar en el jugo de la pera fueron: lisina, alanina y ácido glutámico.

Tabla 2. Cromatogramas unidimensionales tipo desarrollados en las 2 fases móviles.

1ª Fase móvil

2ª Fase móvil

A.A.

Frente del Disolvente

Frente del Soluto

Rf

Frente del Disolvente

Frente del Soluto

Rf

Glutámico

8

2.1

0.2625

7.9

3.1

0.3924

Prolina