FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS Y TECNOLOGÍAS

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Para llevar a cabo la cromatografía en papel de fase inversa, un papel de cromatografía se impregnó con una solución de aceite vegetal (aceite de oliva—aceite de girasol)/ n-hexano, 1:16, en una adaptación de los procedimientos anteriores, y se dejó colgado para secarse durante al menos 15 minutos en una campana de humo antes de la aplicación de la muestra. El eluyente fue en este caso de acetona/agua, 9:1. La aplicación y el tiempo requerido de la muestra para la separación suficiente eran diferentes a la fase normal, se describió anteriormente.

PELIGROS

Todos los procedimientos deben realizarse en una campana de humo con guantes adecuados y protección para los ojos, deben ser utilizados. n-Hexano y acetona son líquidos y vapores altamente inflamables y deben mantenerse lejos de Fuentes de ignición. Hexano y acetona son perjudiciales si son ingeridos, o tienen contacto con la piel. Los vapores pueden causar somnolencia y mareos. La acetona provoca irritación ocular grave. Hay un riesgo de efectos graves para la salud en caso de exposición prolongada por inhalación de hexano, incluyendo un posible riesgo de perjudicar la fertilidad. Él hexano puede ser mortal en caso de ingestión y/o si entra por las vías respiratorias ya que puede causar irritación en la piel. El sulfato de magnesio puede causar irritación en ojos y piel, así como irritación en el tracto respiratorio y digestivo.

RESULTADOS Y DISCUSION

El efecto de los sistemas de la fase normal e inversa es ilustrado en la figura 1. En la figura 1A, el extracto de la hoja de diente de león es separado en un sistema de fase normal, y en la figura 1B, el mismo extracto es separado en un sistema de fase inversa. Como se puede observar, la secuencia de elución es opuesta en estos dos sistemas.

A B[pic 12]

Caroteno [pic 13][pic 14]

Feofitina Xantofilas[pic 15][pic 16]

Clorofila a. Clorofila b[pic 17][pic 18]

Clorofila a [pic 19][pic 20]

Clorofila b. Feofitina[pic 21][pic 22]

Caroteno[pic 23]

Xantofilas

Figura1. Cromatografía (a) fase normal y (b) fase inversa de los extractos de la hoja de diente de león en papel, desarrollado con n-hexano/acetona 9:1 y agua/acetona 1:9, respectivamente.

Separado en un sistema de fase normal, y la figura 1B, el mismo extracto se separa en un sistema de fase inversa. Como puede observarse, la secuencia de la evolución es opuesta en estos dos sistemas.

En el sistema de fase normal las principales manchas aparecen con el aumento de los valores Rf, como una mancha amarilla con terminal (parcialmente oculta por la primera mancha verde), dos manchas verdes, una mancha grisácea, y una mancha amarilla-naranjada. De acuerdo con la polaridad de los componentes y la literatura refiriéndose a los sistemas de la fase normal, lo más probable es que estas manchas correspondan a las xantofilas (con algunos terminales), clorofilas a y b (las dos manchas verdes), feofitina (gris) y B-caroteno (amarillo-naranja) respectivamente. En el sistema inverso, la secuencia de las manchas es revertida; una mancha naranja (muy bien redondeada), una mancha gris, dos manchas verdes, y (con la migración más larga) al menos tres manchas amarillas. Las primeras cuatro manchas corresponden al caroteno, feofitina, y las dos clorofilas. Las siguientes tres se espera que sean xantofilas, lo más probable luteína, violaxantina, y neoxantina, del cual el orden es basado en sus polaridades esperadas, pero es difícil deducir de forma fiable aquí, debido a la interfaz opuesta de la xantofila derivada de ésteres grasos.

RESUMEN

Estos dos experimentos pueden ser demostrados en el salón de clases. Ellos proporcionan un trampolín para discutir la polaridad y la tasa de migración, las características de los sistemas de fase normal e inversa, y una comparación entre ellos. En resumen, estos experimentos ilustran que las fases polares móviles promueven la migración de los compuestos polares, mientras que las fases no polares móviles promueven la migración de compuestos no polares.

CONTENIDO ASOCIADO

Información de soporte

Notas del instructor con detalles experimentales complementarios. Este material está disponible vía internet en la página http://pubs.acs.org.

INFORMACION AUTOR

Autor correspondiente

Correo: lise.kvittingen@nt.ntnu.no.

Notas

Los autores declaran no tener ni un interés financiero en competencia.

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