Hidrólisis de una proteína y ensayos para proteínas y aminoácidos

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Reacción general

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La solución D (solución de Albumina), toma un color amarillo debido a que nos indica que tiene un aminoácido aromático como el triptófano por lo que la prueba se considera positiva ; al agregar NaOH para lograr un pH básico la mescla cambia a color naranja

Reacción de precipitación

Es utilizada para la identificación de enlaces de disulfuro en una proteína

la reacción tiene presencia de agua este lo solubilizara al sulfuro de plomo (hay una interacción proteína-agua) y la reacción se considera negativa debido a que el agua hidroliza a la proteína rompiendo los enlaces de dislufuro. Si la reacción tiene en mayor presencia una interacción proteína-proteína, el sulfuro de plomo no logra solubilizare haciendo una precipitación que nos indicara que la prueba es positiva

el puente de di sulfuro Es un enlace covalente formado por dos grupos sulfidrilo (SH) pertenecientes a un residuo de cisteína que se unen para formar un residuo de cistina como resultado de una reacción de oxidación, al oxidarse que se adicione con los hidrógenos de los sulfuros provocando una unión azufre-azufre y nos va a dar el puente de disulfuro.

solución A Grenetina Hidrolizada no precipito esto nos dice que la grenetina hidrolizada no tiene puentes disulfuros mientras que sa solución D solución de Albumina presento una precipitación esto quiere decir tiene puentes de disulfuro en su estructura

Reacción de Biuret

El Biuret es un reactivo de sulfato de cobre diluido que con una base fuerte es muy bueno para demostrar la presencia de proteínas en una mezcla , la intensidad de color de la reacción es proporcional a la cantidad de proteína de la muestra. Los iones cúpricos forman un complejo de coordinación con los pares no compartidos del Nitrógeno presentes en los aminoácidos de las proteínas. Este tipo de complejo produce un color purpura al reaccionar con lo que se considera positiva que detecta los grupos aminos en las proteínas si la coloración es azul pa prueba es negativa

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Tubo 2 (Grenetina sin Hidrolizar + Hidróxido de sodio + CuSO4) y tubo 5(solución de Albumina + NaOH + CuSO4) El color obtenido es el purpura esperado es decir la reacción logra acomplejarse, se considera positiva porque los iones cúpricos forman complejos de coordinación con los aminoácidos de la proteína sin hidroliza

Mientras que el tubo (Agua+NaOH+CuSO41y el tubo 3(solución de Albumina + CuSO4) es una coloración azul la prueba es negativa

el tubo 4(Grentetina hidrolizada + CuSO4 + NaOH) no hubo ninguna coloración por tanto no hay presencia de proteínas por que se rompieron en el proceso de hidrolización si que no hay forma que los iones cúpricos se acomplejen con los aminoácidos

Tubo 5 (solución de Albumina + NaOH + CuSO4) El color obtenido es el purpura esperado es decir la reacción logra acomplejarse

Reacción de la Ninhidrina

sirve para identificar aminoácidos

Esta reacción se lleva a cabo con aminoácidos que tienen un grupo amino libre se descarboxila y desamina a los aminoácidos gracias a su fuerte poder oxidante indica que no hay aminoacidos, la reacción es positiva para todos los grupos libres en aminoácidos, se considera positiva al tomar un color azul fuerte o-purpura

El Tubo 1 (Agua destilada + ninhidrina) En esta reacción no forma algún tipo de color ya que ni siquiera hay presencia de proteínas

Tubo 3 (Grenetina sin Hidrolizar + ninhidrina )La reacción se considera negativa por que el color que toma la reacción es un rosa pálido por los aminoácidos segue en la proteína a si que no tiene forma de reaccionar

Tubo 2 (Grenetina Hidrolizada + ninhidrina) La reacción obtiene un color purpura debido a que al estar hidrolizada la proteína los enlaces de esta se rompen dejando libres grupos carboxilos y grupos amino que permiten reaccionar con la ninhidrina

Tubo 4 (solución de Albumina + ninhidrina)es incoloro por tanto es negativo

Tubo 5 (Glicina + ninhidrina) La reacción es positiva porque en la glicina al ser un aminoácido puro tiene grupos carboxilos y grupos amino libres y estos grupos libres se pueden unir con la ninhidrina

Reacción de Acido Nitroso

Esta reacción de aminas de los aminoácidos con HNO₂ se utiliza para distinguir las aminas presentes en la reacción por la función del nitrógeno liberando gas formado es la presencia de burbujas que es el gas de nitrógeno emitido el cual es incoloro. El burbujeo indica la presencia de grupos amino libres y por lo tanto nuestra reacción es positiva

Tubo 1 (Grenetina hidrolizada + HCl + Nitrito de Sodio) De las 4 identificaciones es la única reacción positiva por que es la única que burbujeo

Acción reguladora de aminoácidos

El grupo amino permite al aminoácido aminado actuar como base y combinarse con ácidos; el grupo ácido, le permite combinarse con las bases. Los aminoácidos y las proteínas sirven de amortiguadores.

Pueden resistir a cambios de acidez y alcalinidad.

Prueba en acido

- El agua destilada al no contener ningún tipo de proteína el efecto que tiene el rojo Congo es solo colorearla a un rosa tenue y al agregar HCl al ver presencia de acido el rojo Congo que es un indicador de acides se colorea a un Rosa/Claro

- En la solución con Hidrolizado de grenetina neutralizada al agregar el rojo Congo se torna a un color amarillo, esta proteína logra combinarse con el HCl y el indicador vira a Rosa Fuerte. Es decir las proteínas resisten cambios a acidez

Prueba en base

- El agua con fenolftaleína que no contiene ningún tipo de proteína no toma algún color particular si no hasta la adición de NaOH que torna a un color rosa.

- La solución con Hidrolizado de grenetina neutralizada al agregar fenolftaleína se torna a un color amarillo, esta proteína logra combinarse con el NaOH y el indicador vira a Rosa Fuerte Es decir las proteínas resisten cambios alcalinos

Conclusiones