La diabetes mellitus tipo 2 induce defectos cardíacos congénitos en embriones murinos mediante el aumento en el estrés oxidativo, estrés del retículo endoplásmico y apoptosis

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Análisis de cortes histológicos[pic 4][pic 5]

En este corte se utilizó la tinción de hematoxilina y eosina.

Después de ser cultivados, los corazones fueron procesados con metanol 60%, cloroformo 30%, ácido acético glacial 10%, seguidos de impregnación de parafina y cortado secciones de 8 mm. Después de la desparafinización y la rehidratación, todos los especímenes se sometieron a tinción con hematoxilina-eosina en un procedimiento estándar. Se dividieron los corazones en dos grupos, el grupo Control 1 (Ctrl 1), alimentado con una dieta normal, mostró un 5.8 ± 0.46 mmol/L como nivel de glucosa. Este grupo no presentó persistencias del cono arterioso. Por otro lado, el grupo Control 2 (Ctrl 2), alimentado con una dieta de un 60% alta en lípidos durante el embarazo, mostró un nivel de glucosa de 6.9 ± 0.35 mmol/L. Este grupo no presentó persistencias del cono arterioso. El grupo que presentó DM durante el embarazo presentó un nivel de glucosa de 9.3 ± 0.31 mmol/L. Este grupo presenta defectos de persistencia del tronco arterioso así como un defecto septal del ventrículo.

En comparativa con las imágenes de control podemos observar como las imágenes del grupo con diabetes mellitus (DM imagen) presentan falta de cierre del tabique septal y capas delgadas de músculo cardiaco con separación entre fascículos, mientras que en las control 1 y 2 se ve cerrado el tabique septal, las capas de músculo cardiaco son más gruesas en estos se observa un mejor desarrollo de los grandes vasos y la formación de las válvulas aórticas.

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En las siguientes imágenes observamos cortes de corazón de embriones de ratón de 12.5 semanas que fueron procesados con la tinción de Dihidroetidio y observados mediante un microscopio de fluorescencia.[pic 6][pic 7]

Para probar si el estrés oxidativo participa en los defectos cardiacos inducidos por la DM2 materna, se determinaron los niveles de peroxidación de superóxido y lípidos en corazones E12.5 de diabéticos y no diabéticos. El nivel de superóxido se evaluó mediante tinción DHE.

DHE reacciona con el superóxido que está ligado a los componentes celulares, incluyendo proteínas y el ADN, y exhibe fluorescencia de color rojo brillante. Se fijaron corazones embrionarios 12.5 semanas en paraformaldehído al 4% durante 30 minutos, se lavaron 3 veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS) (5 min / lavado) y luego se incorporaron en el compuesto óptimo de temperatura de corte. Se incubaron secciones embrionarias con 1,5 μ mol / L DHE durante 5 minutos a temperatura ambiente, luego se lavaron 3 veces con PBS durante 5 min / lavado. Las secciones se contrastaron con 4 ', 6 - diamidino - 2 - fenilindol (Sigma, St Louis, MO) y se montaron con medio de montaje acuoso (Sigma).

Hubo fuertes señales positivas para DHE en los corazones embrionarios del grupo de DM, mientras que casi no se observaron señales de DHE en los grupos de control. Además, la DM2 materna aumentó significativamente los niveles de peroxidación lipídica en el corazón en desarrollo. Estos hallazgos sugieren que la DM2 materna induce el estrés oxidativo en el corazón en desarrollo.