Laboratorio de determinacion de crecimiento bacteriano
Enviado por Ensa05 • 7 de Abril de 2018 • 1.711 Palabras (7 Páginas) • 361 Visitas
...
Tubos de ensayo con 9 mL de agua peptonada.
Erlenmeyer con 90 mL de agua peptonada.
Cajas de Petri con agar PDA y agar nutritivo.
Cajas de Petri estériles.
Agar nutritivo de 45 a 50 °C.
Agar PDA de 45 a 50°C.
Balanza.
Pipetas estériles de 1 mL.
Asas Digralsky.
Mecheros de Bunsen.
Muestra de tierra de jardín.
Incubadora.
Caldo bilis verde brillante.
Cuenta en placa de bacterias
Pesar 10 g de muestra en condiciones de asepsia y homogenizar con 90 mL del diluyente, realizar diluciones seriadas 1/10⁻¹, 1/10⁻², 1/10⁻³, 1/10⁻⁴, 1/10⁻⁵; a partir de la suspensión inicial.
Se utilizan las muestras de los tubos con la dilución -3, -4, y -5.
Para el método de placa extendida
-con una pipeta se toma 0,1 mL de cada una de las diluciones
-se vierten sobre el agar en cada caja de Petri, 2 repeticiones por dilución.
-esparcir con el asa sobre toda la superficie de la caja con movimientos circulares
-incubar las cajas a 37 °C durante 24–48 horas.
En el método de profundidad
- pipetear 1 mL de cada dilución y llevar a las cajas de Petri estériles; dos repeticiones por dilución.
-verter de 15 a 20 mL de agar nutritivo o PDA temperado a 45 °C.
-mezclar con cinco movimientos circulares suaves en dirección a las agujas del reloj y cinco en la dirección contraria.
-dejar enfriar hasta que solidifique
- incubar a 37 °C de 24- 48 horas.
Numero más probable
Vertido en placa
Utilizando las mismas diluciones en serie se procede a inocular las Placas Petri: Utilizando un marcador, dividiendo la placa petri en cinco zonas de igual tamaño. Rotular cada zona con el factor de dilución a ser inoculado.
Luego se transfiere 5 µl de la dilución apropiada al área correspondiente. Repitiendo esta operación cinco veces por cada dilución. Dejar secar el inoculo e incubar.
Caldo brila
1. A partir de cada una de las diluciones anteriores se procede a inocular los tubos que contienen el caldo Bilis Verde Brillante; tres repeticiones por tubo.
2. Incubar durante 48 ± 3 h a 35 ± 0.5 °C.
3. Después de la incubación observar la presencia de turbidez y de gas.
RESULTADOS
RECUENTO EN PLACA
A.N
SUPERFICIE
R1
103
77
137
PROFUNDIDAD
R2
115
60
49
A.N
SUPERFICIE
R1
150
52
21
PROFUNDIDAD
R2
+300
16
14
PDA
SUPERFICIE
R1
160
24
8
PROFUNDIDAD
R2
87
44
7
PDA
SUPERFICIE
R1
72
58
20
PROFUNDIDAD
R2
147
+300
16
UFC RESULTADO PROMEDIADO DE EL RECUENTO EN PLACA:
AGAR
A.NUTRITIVO
A.PDA
SUP.
PROF.
SUP.
PROF.
UFC
68
34
123
109
[pic 3]
Calculos:
Elegiríamos las diluciones que tienen un número de colonias comprendido entre 30 y 300.
- La media de colonias obtenidas en la dilución 10⁻⁴ de agar nutritivo método de superficie, a partir de la siembra de un volumen de 0.1 mL es 68 UFC, por tanto
[pic 4]
- La media de colonias obtenidas en la dilución 10⁻⁴ de agar nutritivo método profundidad, a partir de la siembra de un volumen de 0.1 mL es 34 UFC, por tanto
[pic
...