Medios de Cultivo de Protozoos.

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Es importante observar todos los detalles posibles en cuanto a medios de cultivo se refiere; hay una diversidad tremenda de éstos, y se innova día con día, ya que el reto de cultivar un medio ambiente artificial microbiológico expone grandes retos para la Microbiología. La mayoría de los microorganismos conocidos, no han logrado cultivarse hasta el momento, este hecho refleja lo mucho que hay por progresar en este aspecto de la Microbiologia.

Cultivos: Observaciones Generales (Cortés, 2010)

- No es conveniente sembrar a los organismos recién recolectados en el medio de cultivo, es preferible hacerlo gradualmente o mejor aún, poner un poco de la muestra original con unos granos de trigo o arroz.

- Para obtener la multiplicación de diversas especies, se puede repartir la muestra y agregar diferentes fracciones del medio de cultivo en diferentes recipientes o en diferentes medios para determinar cual es el óptimo para una especie dada.

- En cultivos mixtos asegurarse tener cuidado de la velocidad con la cual se descompone el sustrato.

- Se pueden hacer subcultivos cuando en el medio alcanzan el crecimiento máximo, tomando una pequeña cantidad del medio original con medio limpio (estéril si es el caso).

- En términos generales, es preferible mantenerlos hambrientos a sobrealimentados.

- Objetivo:

- Analizar las muestras obtenidas, para reconocer la diversidad de especies de microorganismos presentes en ella.

- Comprender lo que es un medio de cultivo, los tipos y diferencias que existen entre éstos.

- Analizar las diferencias entre un medio de cultivo en la Microbiología de Protistas, y la Microbiología de Virus y Bacterias.

- Consultar la bibliografía disponible para elegir medios de cultivo adecuados para las especies presentes en la muestra.

- Realizar medios de cultivo diversos, como método de experimentación para comprender la efectividad y defectos de cada medio de cultivo.

- Material y Método:

Microscopio óptico

Microscopio estereoscópico

Autoclave u olla de presión

Perilla eléctrica

Muestras de agua recolectadas en diferentes localidades

Portaobjetos y cubreobjetos

Frascos de boca ancha de 1 L

Frascos de boca ancha de 50 ml

Cajas de Petri

Cristalizadores de 1 L

Cristalizadores de 250 ml

Tubos de ensayo

Tapas de vidrio esmerilado

Pipetas Pasteur con bulbo

Vasos de precipitado de 250 ml

16 Vasos de precipitado de 1 L

Vasos de precipitado de 50 ml

Rollo de plástico adherente

Rollo de papel encerado

Ligas

Algodón no absorbente

Etiquetas adherentes

Granos de arroz

Granos de cebada

Granos de chícharo

Granos de maíz

Granos de trigo

Paja

Suelo de jardín

Tamices 16, 8, 3.4 mm

Cultivos polixénicos

El cultivo Polixénico permite la observación de la diversidad de protozoos que se pueden encontrar en una muestra recolectada en un cuerpo de agua y es el que se sugiere para iniciar a los alumnos en el conocimiento de los protozoos.

Se recolecta una muestra de agua y sedimento en un ambiente dulceacuícola como Xochimilco, Chapultepec u otro cuerpo de agua (ver métodos de recolecta) utilizando los frascos de 1 litro. También puede será adecuada el agua de floreros, que tenga más o menos 5-8 días de haberse colocado las flores, o el agua de acuarios (anotar en la etiqueta la localidad o procedencia de la muestra, así como la fecha).

En el laboratorio se hace una revisión preliminar, observando bajo el microscopio preparaciones frescas de las muestras, y con ayuda de la bibliografía especializada de hace una determinación preliminar de los diferentes protozoos observados.

Preparación de infusiones

Las infusiones de granos y hojas de plantas aumentan la cantidad de compuestos orgánicos que estimulan el crecimiento bacteriano y como consecuencia el crecimiento de los protozoos, en especial de flagelados y ciliados bacterívoros.

17 El agua que se utiliza para las infusiones puede ser la recolectada en el medio natural, o agua de la llave o agua destilada. Algunos recomiendan utilizar agua mineral embotellada (no carbonatada) la cual provee una composición química adecuada. El agua del medio natural debe contener muy poca contaminación de compuestos químicos o residuos animales la cual se filtra inmediatamente después de su recolecta y posteriormente se hierve por unos minutos. La utilización del agua de la llave es muy frecuente, pero debe tener un bajo contenido de metales. Se recomienda que cualquier agua que se utilice, se hierva y se deja por un día para que se acumule el oxígeno disuelto, antes de que sean inoculados los organismos.

Algunos substituyen el agua por una solución de sales conocida como medio Chalkley:

Cloruro de sodio 0.1 g

Cloruro de potasio 0.004 g

Cloruro de calcio 0.006 g

Agua destilada 1000 ml

Infusión