PRÁCTICA No. 4 PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

...

En el campo de las cepas, se pueden observar diversos microorganismos de acuerdo a la base del medio empleado.

- Agar MacConkey: Identifica selectivamente a enterobacterias como Salmonellas, Shigellas y coliformes a partir de heces fecales, orinas, aguas negras y diversos alimentos.

- Escherichia coli, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Arizona, Citrobacter, Proteus, Pseudomonas, Salmonella, Shigella, Estafilococos, Enterococos.

- Agar de Sal y Manitol: Muy empleado para aislar estafilococos patógenos de materiales clínicos diversos (orina, genitales, heridas, exudados faríngeos, etc.). También se utiliza en la industria alimenticia con los mismos fines, el aislamiento e identificación de estafilococos que se encuentran en la leche y productos lácteos, carnes y derivados cárnicos incluyendo conservas de pescado.

- Agar para Salmonella y Shigella (Agar SS): Empleado en bacteriología sanitaria para aislar Salmonella y Shigella, a partir de heces, orina y alimentos diversos, tanto frescos como enlatados.

- Shigella y la mayor parte de las Salmonelas, Escherichia coli, Enterobacter, Klebsiella, Proteus.

- Agar de Vogel Johnson: Permite una determinación temprana de las colonias de estafilococos coagulasa positivos y manitol positiva.

- Base de agar sangre es adecuada para aislar y cultivar diversos microorganismos de difícil crecimiento. Al añadir sangre, puede usarse para descubrir la actividad hemofílica y para aislar bacilos tuberculosos.

- Caldo tioglicolato (NIH): se puede usar para el análisis de esterilidad de productos farmacéuticos.

- Agar nutritivo, es un medio de uso general en el laboratorio, no selectivo y adecuado para el cultivo de microorganismos poco exigentes. Puede emplearse en bacteriología sanitaria, médica e industrial.

FUNDAMENTO:

Un medio de cultivo es una sustancia en la que se puede desarrollar un microorganismo; contiene los elementos nutritivos esenciales en una concentración adecuada, la necesaria cantidad de sales, el adecuado volumen de agua, exento de sustancias inhibidoras del organismo que se va a cultivar, tiene la consistencia deseada, el pH adecuado y es estéril.

OBJETIVO:

- Elaborar medios de cultivo, que se utilizaran para el aislamiento e identificación de bacterias.

MATERIAL:

- Matraces Erlenmeyer de 500ml

- Probeta graduada de 250 ml

- Cajas Petri

- Tubos c/ tapón de rosca de 13 x 100.

- Parrilla de calentamiento.

- Gasa

- Algodón

- Mechero Bunsen

- Espátula limpia.

- Desinfectante

- Preparar los siguientes Medios (aproximadamente 50 ml de los caldos y 100 ml de cada agar):

- EMB

- AGAR SANGRE

- AGAR CHOCOLATE

- AGAR VOGEL JOHNSON

- AGAR SS

- CALDO NUTRITIVO

- CALDO TIOGLICOLATO.

- AGAR SAL Y MANITOL

- AGAR MACCONKEY

TÉCNICA:

- Consultar las indicaciones del fabricante del medio de cultivo a preparar para conocer las condiciones en las que se elaborara el medio.

- Pesar exactamente la cantidad del medio de cultivo calculada por regla de tres en relación con la especificada en el envase para un litro. El medio deshidratado se debe pesar en papel aluminio o cera, limpio.

- Al medio de cultivo pesado se le añade aproximadamente la mitad del agua destilada, se agita lo suficiente tratando de hacer una suspensión homogénea, se deja reposar unos minutos y después se le adiciona el resto del agua arrastrando el medio que pudo quedar pegado en las paredes del matraz.

- El medio de cultivo se debe calentar para disolverlo. Este calentamiento debe efectuarse en baño María o directamente en la parrilla. El medio estará listo cuando al agitar el recipiente no se adhieran a las paredes internas, partículas del agar. Es necesario que el tiempo de calentamiento sea el indicado, ya que los medios de cultivo son muy sensibles. Los medios de cultivo que no contienen agar son fáciles de disolver en el agua fría o con un ligero calentamiento.

- La esterilización del medio de cultivo se lleva a cabo en autoclave, a 121 °C durante 15 minutos. Se recomienda repartir el medio en porciones más pequeñas por ejemplo, en los tubos donde va a quedar definitivamente, no se recomienda esterilizar en las cajas Petri.

- Se debe verificar si el pH del medio preparado es el especificado, este puede ser medido con un potenciómetro, si el medio es sólido debe ser medido a una temperatura de 45 o 50°C (líquido) y si es líquido a temperatura ambiente.

- El vertido en placas se debe hacer, cuando el medio se encuentre a una temperatura de 45 o 50 °C, en un ambiente estéril, evitando la formación de burbujas, si esto ocurre al terminar el vaciado se pasa el mechero rápidamente por la caja con el medio. El volumen que se le agrega a la caja es de unos 15 o 20 ml. En los tubos dependiendo del tamaño se adicionara aproximadamente la mitad del tubo cuando son agares, y para el medio de cultivo líquido (caldos) se le agregara a cada tubo de 2 a 3 ml.

- Cuando el medio de cultivo este solidificado o frío se empaquetaran en cajas o en tubos y se rotularán con el nombre del medio, fecha de preparación, numero de equipo que lo elaboro y se guardaran en el refrigerador en forma invertida.

OBSERVACIONES:

Durante ésta práctica se prepararon diversos medios de cultivo, los cuales, por cuestión de tiempo se repartieron entre los siete equipos que somos en el grupo. Cabe destacar que a cada uno le toco uno diferente, más a aparte todos los equipos llevamos a cabo la realización de la base de agar sangre.

En nuestro caso, realizamos también el agar MacConkey, siguiendo las indicaciones del fabricante