Medios de cultivo Streptomyces.

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A los lisados se añaden 4ml de una solución de AcOK 3M pH6 para precipitar los restos de proteínas, DNA cromosómico desnaturalizado, etc. Posteriormente se extrae con un volumen de fenol: cloroformo neutro y la fase acuosa se precipita con 1 volumen de isopropanol sin añadir sales, ya que la concentración salina es alta por el proceso anterior. Después de dos lavados Con etanol 75% se disuelve en TE con RNAsa a una concentración de 50ug /ml. Se incuba a 37oC durante 30 minutos y se vuelven a repetir los ciclos de extracción con fenol: cloroformo y precipitación, disolviéndose al final en 70ul de TE.

La conservación de las cepas de Streptomyces se realiza en forma de suspensión de esporas (o de micelio en el caso de mutantes que no esporulan) en glicerol al 20% y se guardan a —200C.

La selección de cepas bacterianas se realiza añadiendo a los medios de cultivo diferentes antibióticos en las condiciones que señala la siguiente tabla: (unidades en ul/ml)

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Aislamiento Y Obtención de Cultivo Puro

Para el aislamiento se diluye la muestra en agua destilada estéril a las concentraciones de 1 en 1.000, 1 en 10.000 y 1 en 100.000. De estas diluciones se pusieron 1 c. c. por placa Petri y se adicionó después en cada placa 10 c. c. de agar-albúmina de huevo previamente fundida y enfriada después hasta unos 42- 44o C, se mezcló bien por ligero movimiento de rotación de las placas, se dejaron estas enfriar para que solidificaran el medio y después se pusieron las placas en la estufa a 28o. por cada dilución se sembraron tres placas.

A los pocos días de incubación aparecieron en las placas pequeñas colonias mates de color blanquecino algo grisáceo.

Resembrar de estas colonias en placas de agar-glucosa-esparraguina para obtener un cultivo puro y de las placas se resembro a tubos con agar-glucosa-esparraguina en los que los Streptomyces esporulan bien y que es el medio que corrientemente se emplea para conservar cultivos de Streptomyces