Observaciones de bacterias tinciones simples y compuestas

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- Tinciones diferenciales.

Figura 1.3 formas básicas en las que puede visualizarse los cocos y bacilos

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- Gram negativas: La técnica de tinción es básicamente la misma. En cuanto a reactivos al final del proceso se agrega el colorante de contraste que será el azul de metileno. Ahora bien, el resultado es totalmente diferente, ya que morfológicamente y estructuralmente las bacterias Gram negativas difieren de las Gram postivas. La pared celular de las bacterias Gram negativas como E.coli , Pseudomona klebsiella, Es una pared mediada por dos membranas celulares, una interna y otra externa, compuestas de fosfolípidos, liposacaridos, lipoproteínas, entre otros. La pared es más delgada, y por ende con menor contenido de peptidoglicano teniendo un porcentaje de 10 a 20%. Durante la tinción la bacteria se tiñe con el cristal violeta de color violeta igual que en las Gram postivas, pero cuando se le agrega el alcohol-cetona, este es capaz de diluir los fosfolípidos de la membrana externa e incluso dañarla, entrando al interior de la bacteria y decolorándola, sin que la pared pueda retener el cristal violeta por ser muy baja la concentración del peptidoglicano. Finalmente se agrega el azul de metileno, colorante de contraste, que permitirá que la bacteria Gram negativa (incolora hasta el momento) se tiña de azul.

- Figura 1.4 E.coli y Pseudomona

- Ecoli.

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La Escherichiacoli (E. coli) es una bacteria que se encuentra normalmente en el intestino del ser humano y de otros animales. “Aunque no parece que su presencia tenga una función especialmente relevante, se ha descrito que la bacteria E. coli favorece la absorción de algunas vitaminas, especialmente la vitamina K”, explica José María Marimón, experto de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica (SEIMC). (Echeverri-López, 2009).

Pseudomona

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Las bacterias Gram negativas como E.coli y Pseudomona. Son bacterias muy patógenas, con una resistencia a los medicamentos por su pared celular. Por un lado, el lípido A (la parte lipídica del lipopolisacárido) es una endotoxina y es capaz de estimular respuestas del sistema inmunitario generando una reacción tóxica responsable de muchos de los efectos patógenos. Por otro lado, la membrana externa supone una barrera de protección que impide o dificulta la actividad de agentes antimicrobianos como pueden ser antibióticos o detergentes antisépticos. Por ejemplo, la membrana externa de las bacterias Gram negativas es la responsable de que sean resistentes a la lisozima y a la penicilina. No obstante, hay disponibles antibióticos con actividad frente a las bacterias Gram negativas, por ejemplo, la estreptomicina o la ampicilina.

Gram positiva: Bacillus spp. y Staphylococcus spp.

Las tinciones diferenciales se utilizan para clasificar morfológicamente las bacterias como Gram positivas y Gram negativas (en este caso, los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico, sino simplemente designan dos grupos morfológicos distintos de bacterias). Se basan en el uso de dos colorantes. Se realiza una tinción primaria, con la misma técnica de la tinción simple y posteriormente una tinción de contraste para teñir las células que no se hayan teñido previamente. En el caso de las bacterias Gram positivas como Bacillus spp y Staphylococcus spp. Son bacterias que tienen unas características especiales a nivel celular, como su pared celular. La pared celular de los Bacillus y Staphylococoos. Es una pared muy gruesa, llena de peptidoglicano 98% y algo de lípidos y ácidos teicoicos. En la tinción el primer componente que se aplica es el cristal violeta un colorante básico, que para tiñe de azul la bacteria. Seguido se aplica una solución de lugol que contiene Yoduro de potasio (KI), el Yodo entra a la célula y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. En este momento se lleva a cabo la decoloración con el alcohol- cetona, sustancia que puede solubilizar el complejo del cristal violeta-I2, pero el Bacillus spp. Y Staphylococcus spp. no se deja decolorar, permaneciendo con el mismo color violeta. Las bacterias Gram positivas no se decoloran porque el alcohol-cetona, hace que los poros de la pared se cierren, sin poder pasar al interior de la célula evitando la decoloración.

Figura 1.1 Bacillus y Staphylococcus

Staphylococcus spp.

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- Bacillus spp.

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Figura1.2 forma de racimos del Staphylococcus aureus y forma de Bacillus spp.

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El Staphylococcus aureus son cocos positivos que crecen en casi todos los ambientes, con una margen de temperatura de 5°C- 25°C. En los humanos suele encontrarse en las mucosas y en la piel. Los ácidos teicoicos le permiten adherirse a superficies corporales y les sirven para no ser fagocitadas.

Las infecciones por estafilococos pueden ser potencialmente mortales si la bacteria invade el cuerpo más profundamente, entrando en el torrente sanguíneo, las articulaciones, los huesos, los pulmones o el corazón. (Chans, 2009).

En general las bacterias Gram positivas son menos resistentes a antibióticos como la penicilina que mata a las Gram positivas, ya que bloquea la formación de enlaces peptídicos entre las diferentes cadenas del peptidoglicano.

Tinción de Zielh -Nieelsen: Mycobacterium tuberculosis

La técnica de Zielh-Nieelsen es usada para bacterias que no se dejan teñir con las tinciones de Gram. Las paredes celulares de ciertas bacterias contienen ácidos grasos o ácidos micólicos y una gran cantidad de fosfolípidos (como las micobacterias) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con los colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistente. Las micobacterias como Mycobacterium. tuberculosis se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración con fucsina fenicada requiere pasar por el calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva