“Preparación de medios de cultivo y esterilización y aislamiento e inoculación de microorganismos”

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- METODOLOGÍA

Bacterias: Método de estría cruzada (Bacillus subtilis).

Levaduras: Método de estría cruzada (Saccharomyces cerevisiae).

Hongo: Método de inoculación y transferencia (Penicillium sp).

Medios de Cultivo: Agar Nutritivo (AN) y Agar Dextrosa Sabouraud (ADS).

Material:

- 15 Tubos de 18 x 150 con taparroscas, previamente etiquetados.

- 7 cajas Petri.

- 2 matraces Erlenmeyer de 250 mL.

- Probeta de 100 mL.

- Mechero.

- Tripié.

- Tela de asbesto.

- 2 Pipetas de 10 mL esterilizadas.

- Gradilla.

- Canastilla de metal.

- Autoclave.-

- Medios de cultivo Preparación.-[pic 3]

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- Uso del autoclave.-[pic 6]

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- Método de inoculación y transferencia.-

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NOTA.- Las inoculaciones deben ser realizadas con rapidez, antes de que el agar solidifique.

- Método de estría cruzada

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- OBSERVACIONES

- Bacillus subtilis y Saccharomyces cerevisiae por el método de estrías cruzadas.-

Las colonias aisladas de Bacillus subtilis son redondas de forma irregular con una coloración opaca de color blanco (Ver Figura 4).

Las colonias aisladas de la levadura Saccharomyces cerevisiae son de color crema de forma ovalada (Ver Figura 4).

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Figura 4.- Aislamiento por estría después de dos semanas de incubación en tres campos; a) Saccharomyces cerevisiae; b) Bacillus subtilis.

En la caja Petri de las colonias aisladas de la levadura Saccharomyces cerevisiae se presentó una contaminación con textura algodonosa color blanca por la parte superior y negra de la parte inferior, con el tiempo fue creciendo hasta cubrir la mayor parte de la caja Petri (Ver Figura 5).

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Figura 5.- Vista superior del aislamiento por estría después de dos semanas de incubación en tres campos de Saccharomyces cerevisiae.

- Penicillium sp por el método de inoculación.-

En la primera caja Petri se puede observar una gran cantidad de colonias de Penicillium sp con coloración verde oliva en forma circulares y a distintos mañanas. En la segunda y tercera caja Petri no se observa el crecimiento de ninguna colonia en comparación con la primera caja Petri (Ver Figura 6 Y 7).

Las colonias de Penicillium sp son pulverulentas, levantadas de color verde aterciopeladas. Al reverso de estas no se observa ningún pigmento difusible (Ver Figura 6).

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Figura 6. Aislamiento por inoculación y transferencia del hongo Penicillium sp después de 2 semanas de incubación.; a) ; b) ; c) .[pic 17][pic 18]

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Figura 7. Aislamiento por inoculación y transferencia del hongo Penicillium sp después de 2 semanas de incubación en la dilución 1.

- DISCUSIÓN DE RESULTADOS

- Bacillus subtilis y Saccharomyces cerevisiae por el método de estrías cruzadas.-

En cuento al método de estrías la caja Petri de S. cerevisiae se observó una colonia negra , esto nos da una pauta de que nuestro cultivo se contamino , debido a que no se trabajó dentro del área de trabajo o a su vez que la caja Petri no fue sellada correctamente. Se pudo apreciar las colonias aisladas de la levadura.

En la de B. subtilis se observa que en el tercer campo (más diluido), se encuentras colonias aisladas de esta bacteria, las colonias tienen apariencia redonda de coloración blanco.

- Penicillium sp por el método de inoculación.-

Entre los factores que pudieron influir para que no se observara ninguna colonia en el método de inoculación y transferencia fue que el asa bacteriológica estaba muy caliente y al momento de tomar una asada del cultivo esto condujo a la muerte de nuestro microorganismo y por lo tanto no creció en el agar de la caja Petri.

- CONCLUSIÓN

En esta práctica se pudo aplicar las dos técnicas de aislamiento como es la de siembra por estría cruzada e inoculación y transferencia en condiciones de asepsia con la intención de realizar el estudio de los microorganismos como son bacillus subtilis, saccharomyces cerevisiae y penicillium sp para analizar con detalle sus características morfológicas macroscópicas.

- BIBLIOGRAFÍA

- Garza Gonzales, M. T., Porras A., O. C., & gomez Vega, F. (2013). Manual de practicas de Fundamentos de microbiologia y bioquimica. Mexico: Faculta de Ciencias Quimicas.

- (s.f.). Obtenido de

https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo

- (s.f.). Obtenido de https://conalepfelixtovar.wordpress.com/2012/09/26/tecnicas-y-metodos-de-aislamiento-y-seleccion-de-microorganismos/