Respuesta de la masa muscular al entrenamiento físico en la trucha arco iris Oncorhynchus mykiss ante la presencia de la miostatina y la via de señalización de la calcitenuria

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Se utilizará el sistema de Laemmli discontinua (Laemmli, 1970) para la electroforesis de proteínas. Se usarán 6%, 12% y 15% las concentraciones de gel de resolución. 1 · geles gruesos mm se emitirá bajo Mini-Protean · aparato III (Bio-Rad Laboratories Ltd., Hemel Hempstead, Herts). Las masas moleculares de la calcineurina subunidad catalítica A (CNA), la calcineurina subunidad reguladora B (CNB) y la miostatina se determinarán utilizando estándares Cruz Marker (Santa Cruz Biotechnology Inc., Santa Cruz, CA, EE.UU.), la masa molecular de NFAT2 usando alto normas biotinilados rango (Bio-Rad Laboratories Ltd). Se utilizaraán condiciones de electroforesis estándar: 100 · V (constante), 30-45 mA (variable). geles de resolución se teñirán con azul de Coomassie (Fazekas de St. Groth et al., 1963) para comparar la carga de proteínas y se fotografiarán usando el sistema de formación de imágenes VersaDoc 3000 (Bio-Rad Laboratories Ltd).

Celularidad de la fibra muscular

Un filete 5 mm de espesor se diseccionará en todas las capturas inmediatamente anterior a la aleta anal. El esquema de carne será rastreado sobre una hoja de acetato para la medición del área en sección transversal total del músculo. El lado derecho de la miotoma se dividirá en cuatro bloques de tejido. Cada bloque de tejido se colocará en un azulejo de corcho, cubierto de Cryomatrix, broche de congelados en nitrógeno líquido isopentano (-159 ° C) se enfría y se almacena a -80 ° C. secciones de criostato de serie transversales (7 mm) serán cortados en ángulo recto con el eje longitudinal de los peces (Cryocut 1800, Reichert-Jung, Leica, Deerfield, IL, EE.UU.). Las secciones de tejido serán teñidas con hematoxilina de Mayer y se fotografiarán usando una cámara de captura de imágenes (TK-F7300U, JVC) conectado a un microscopio óptico con un objetivo 10 (Laborlux S, Leitz, Rockleigh, NJ, EE.UU.). Se midierán 1200 musculares rápidas áreas transversales por pez, a partir de imágenes de campos aleatorios de vista, el uso de software de análisis de imagen Sigma Scan Pro (v. 5.0.0 ·, SPSS Inc., EE.UU.). diámetro de la fibra muscular (D) se expresará como el diámetro del círculo equivalente de la medición utilizando Sigma Scan Pro.

Análisis estadístico

La distribución de los datos se evaluará mediante la prueba de Anderson-Darling de la normalidad. Se compararán mediante análisis de covarianza (ANCOVA) y pruebas de Tukey (Zar, 1996). La distribución de diámetro de la fibra del músculo se comparará mediante una prueba de Kolmogorov-Smirnov no paramétrico. Las concentraciones de proteína media se compararán mediante ANOVA y pruebas de Tukey (o los equivalentes no paramétricos). Todas las pruebas estadísticas se realizarán utilizando el software Minitab (v · 13.2, Minitab Inc., NY, EE.UU.).

- Referencias bibliográficas

- Amali, A. A., Lin, C. J.-F., Chen, Y.-H., Wang, W.-L., Gong, H.-Y., Lee, C.-Y., Ko, Y.-L., Lu, J.-K., Her, G. M., Chen, T. T. and Wu, J.-L. (2004). Upregulation of muscle-specific transcription factors during embryonic omitogenesis of zebrafish (Danio rerio) by knockdown of myostatin-1. Dev. Dyn. 229, 847-856.

- Blanco C., 1999 La trucha Cría Industrial. Ediciones Mundi-Prensa Madrid – España

- Blough, E., Dinnen, B. and Esser, K. (1999). Extraction of nuclear proteins from striated muscle tissue. BioTechniques 26, 202-206.

- Bristow, P., 1992. "The illustrated encyclopedia of fishes". Chancellor Press, Londres.

- Dunn, S. E., Burns, J. L. and Michel, R. N. (1999). Calcineurin is required for skeletal muscle hypertrophy. J. Biol. Chem. 274, 21908-21912.

- Frimodt, C., 1995. "Multilingual illustrated guide to the world's commercial coldwater fish". Fishing News Books, Osney Mead, Oxford, Inglaterra. 215 p.

- Guerini, D. (1997). Calcineurin: Not just a simple protein phosphatase. Biochem. Biophys. Res. Comm. 235, 271-275.

- Laemmli, U. K. (1970). Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, 680-685.

- Lowry, O. H., Rosebrough, N. J., Lewis Farr, A. and Randall, R. J. (1951). Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem. 19, 265275.

- Maniatis, T., Sambrook, J. and Fritsch, E. F. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd edn), pp. 18.38-18.39. New York: Cold Spring Harbour Laboratory Press.

- Martin, C. I. (2003). The effect of exercise on muscle growth and musclespecific gene expression in the common carp (Cyprinus carpio L.) and rainbow trout (Oncorhynchus mykiss Walbaum). PhD thesis, University of St Andrews, p138.

- McDowall, R.M. y R.D.J. Tilzey, 1980. "Family Salmonidae, salmons, trouts and chars". p. 72-78. En R.M. McDowall (ed.) Freshwater fishes of south-eastern Australia. A.H. & A.W. Reed Pty. Ltd. Sydney, Australia.

- McPerron, A.C., and Lee, S.J., 1997. Double muscling in cattle due to mutations in the myostatin gene. Proc Natl.Acad.Sci U.S.A,94 (23), 12457-61.

- Musaro, A., McCullagh, K. J. A., Francisco, J. N., Olson, E. N. and Rosenthal, N. (1999). IGF-1 induces skeletal muscle hypertrophy through calcineurin in association with GATA-2 and NF-ATc1. Nature 400, 581585.

- Norrbom, J., Sundberg, C. J., Ameln, H., Kraus, W. E., Jansson, E. and Gustafsson, T. (2004). PGC-1alpha mRNA expression is influenced by metabolic perturbation in exercising human skeletal muscle. J. Appl. Physiol. 96, 189-194.

- Rodgers, B. D., Weber, G. M., Kelley, K. M. and Levine, M. A. (2003). Prolonged fasting and cortisol reduce myostatin mRNA levels in tilapia larvae; short-term fasting elevates. Am. J. Physiol. 284, R1277-R1286.

- Shaw, K. T.-Y., Ho, A. M., Raghavan, A., Kim, J., Jain, J., Park, J., Sharma, S., Rao, A. and Hogan, P. G. (1995). Immunosuppressive drugs prevent a rapid dephosphorylation of transcription factor NFAT1 in stimulated immune cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92, 11205-11209.

- Schuelke, M, et al, 2004. Myostatin mutation associated with gross muscle hypertrophy in child. N.Engl.J.Med., 350 (26), 2682-88.

- Thomas, M, et al, 2000. Myostatin, a negative regulator of muscle growth, functions by inhibiting myoblast proliferation. J Biol.Chem, 275(51),40235-43.

- Walker, M. G. and Pull, G. (1973). Skeletal muscle function and sustained swimming speeds in the coalfish Gadus virens L. Comp. Biochem. Physiol. 44A, 495-501

- Xu, C.,