TP Nº 1: MEDIOS DE CULTIVO

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- Auxinas

- Citoquininas

- Giberelinas

- Etileno

- Acido abscísico

En la planta pueden encontrarse en forma libre o ligadas, considerando a esta última como una forma de “almacenaje”.

Son considerados mensajeros químicos pues establecen una comunicación intercelular a través de toda la planta. En la célula las hormonas interactuan con una proteína específica denominada receptor. El complejo hormona- receptor es la forma activa de la hormona.

Una segunda fase incluye la activación o represión de genes específicos.

De la misma forma que en la naturaleza, en donde cada hormona interactúa con otras hormonas para producir una respuesta en la planta, los reguladores vegetales de crecimiento (PGR) son utilizados, en cultivo in vitro, en concentraciones del orden de partes por millón (ppm) y la elección del tipo de PGR y la cantidad relativa de cada uno de ellos en el medio de cultivo está determinada por la respuesta esperada.

Ejemplos de PGR utilizados en cultivo in vitro de plantas

Clase de Reguladores

Abreviatura o nombre común

Nombre químico

Auxinas

AIA

Ác. 3-indolacético

ANA

Ác. Naftalenoacético

AIB

Ác. Indolbutírico

ApCFA

Ác. (4-clorofenoxi) acético

2,4-D

Ác. 2,4-diclorofenoxiacético

Picloran

Ác. 4-amino-3,5,6-tricloropico-línico

ANOA

Ác. naftoxiacético

Citoquininas

Kinetina (KIN)

6-furfurilaminopurina

BAP (BA)

6-benzilaminopurina. 6-benziladenina

2Ip

Isopentiladenina

Zeatina (ZEA)

N-(4-hidroxi-3-metilbut-2-enil) aminopurina

PBA

(6-benzilamino)-9-2-tetrahidropiranil-9H-purina

Tidiazurón (TDZ)

1-fenil-3(1,2,3-tidiazol-5il)urea

Giberelinas

Ac. Giberélico (GA3)

2,4a,7-trihidroxi-1-metil-8-metilen-gib-3-ene-1,10-ácido carboxílico-1,4-lactona

Inhibidores

ABA

Ácido abscísico

Etileno

Etileno

C2H4

Ethephon, Ethrel

Ácido 2-cloroetilfosfónico

- Mezclas complejas utilizadas para la preparación de medios de cultivo

Para la estandarización de un medio de cultivo es necesario que los componentes y sus cantidades sea reproducibles, aun así se usan mezclas complejas como extracto de levadura, agua de coco, extracto de malta e incluso extractos del mismo material vegetal a cultivar. También se usan extractos de micelios autoclavados de algunos hongos y otros elicitores para inducir la síntesis de metabolitos secundarios.

- Otros aditivos

Son utilizados en casos de especies que muestran dificultades para expresar una respuesta en cultivo in vitro. Como ejemplo pueden mencionarse a la adenina, etilxantato de sodio, glutatión, antibióticos, fungicidas, aunque el más utilizado es el carbón activado.

- Agentes gelificantes

Los medios de cultivo pueden ser líquidos o sólidos. En el primer caso normalmente exige algún soporte o agitación para asegurar la oxigenación del explante. Se usan puentes de papel de filtro o de fibras de celulosa, o se colocan los medios en agitadores orbitales (shaker) o en recipientes con flujo y reflujo del medio de cultivo.

En los medios sólidos o semisólidos se utilizan diferentes agentes gelificantes. El agar es un polisacárido extraido de algas marinas, debe disolverse en agua hirviendo y la gelificación se logra a pH 5.8 aproximadamente.

Actualmente existen otros agentes gelificantes como el “phytagel” comercializado por Sigma y el “gerlite” de la firma Merck & Co. Todos están constituídos por polisacáridos del ácido glucurónico con ramnosa y glucosa y grupos O-acetil.

- El pH

Es necesario ajustar el pH de la solución con el fin de lograr una correcta gelificación del medio y considerando que el pH también incide en la capacidad de absorción de sales minerales. En general el pH no debe ser inferior a 5,8 y es ajustado con ClH o NaOH 1N, luego de agregar todos los ingredientes excluido el agente gelificante. En ocasiones se agrega soluciones tampón (MES), debido a que la capacidad tamponante de los medios de cultivo es baja y los valores de pH decrecen con el autoclavado y, en muchos casos, se altera por la absorción de iones durante el cultivo y con la excreción de metabolitos del explanto.

PROCEDIMIENTO PARA PREPARAR UNA SOLUCION MADRE DE MS X 10

Materiales

∙ Balanza analítica

∙ Vasos de precipitado y matraces Erlermeyer

∙ Frascos para almacenar soluciones

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