TRABAJO DE BIOLOGIA, TEMA: BIOMOLECULAS I –PROTEINAS Y ENZIMAS

...

- NaOH al 40%

- Ácido sulfhídrico al 75%

- Placas de porcelana

- Solución de NaCl al 20%

[pic 6]

1°DESNATURALIZACION DE PROTEINAS:

-Colocar 6 tubos de ensayo(enumerado del 1 al 6)en una gradilla y verter 1ml de solución albúmina a cada uno de ellos (verificar que la solución albúmina haya sido colocada adecuadamente).

-Realiza los siguientes tratamientos a cada uno de ellos:

Tubo 1: Someter a baño maría por 3 minutos.

Tubo 2: Añadir 1ml de acetona.

Tubo 3: Añadir 1ml de ácido sulfhídrico al 75%.

Tubo 4: Añadir 1ml de cloruro de sodio al 20%.

Tubo 5: Añadir 1ml de ácido nítrico.

Tubo 6: Añadir 1ml de agua destilada.

2°DETERMINACION DE PRESENCIA DE PROTEÍNAS(REACCIÓN DE BIURET):

-En un tubo de ensayo colocar 1ml de solución de albúmina al 1%, agregar 1ml de solución de NaOH al 40% y mezclar.

-A la mezcla añadir 2 gotas de sulfato de cobre al 1%. La reacción es positiva si se observa un color violeta en la mezcla.

-Hacer blanco negativo o control repitiendo el experimento y sustituir la albúmina por agua destilada .Anotar en el cuadro de soluciones.

3°RECONOCIMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA:

-Coger aproximadamente el mismo peso de hígado, carne, papa picada y frijol;y colocarlos en el tubo de ensayo.

-Luego al mismo tiempo añadir 1ml de agua oxigenada (H2O2)a cada tubo de ensayo.

-Anotar lo que sucede en cada tubo .

-Ordenar los tubos según su actividad enzimática (burbujeo-velocidad, cantidad) y anotar en el cuadro de resultados.

4° REACCION AMILOLITICA

-Utilizar los cuatro pozos extremos de una placa de porcelana .

-colocar en cada pozo :

A)Cuatro gotas de lugol.

B)15 gotas de almidón + 2 gotas de lugol.

C)15 gotas de almidon + 10gotas de saliva,después de 10 minutos , 2 gotas de lugol.

D) D)10 gotas de saliva + 10 gotas de ácido sulfúrico , después de 10 minutos , 10 gotas de almidón ; luego 7 minutos , 2 gotas de lugol.

[pic 7]

1°DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS

TUBO

N°

SOMETER A

OBSERVACIONES

DESNATURALIZACION

(+) O (-)

1

Baño maría

Se convierte en una masa blanda ,blanca y sólida .

(+)

2

Acetona

Se convierte en una solución blanquecina.

(+)

3

Ácido sulfhídrico

Solución blanquecina

(+)

4

NaCl

La solución es un poco blanquecina

(+)

5

HNO3

La solución es amarillenta

(+)

6

Control

Solución homogénea

(-)

EN EL TUBO Nº1 Las proteínas pueden ser desnaturalizadas por distintas formas, en este caso, fue por el calor , debido a que el aumento de temperatura favorece las vibraciones intensas dentro de la molécula, y la energía de estas vibraciones se puede volver lo suficientemente intensa, como para desorganizar la estructura terciaria (Esta aseveración también la hace J. A. Lozano , G. Cáscales . 1995)

EN EL TUBO N° 2 (albumina + acetona), la adición de un disolvente orgánico como la acetona produce que la estructura terciaria de la albumina se pierda y como consecuencia se despliega la cadena polipeptidica, es decir, la desnaturalización de la proteína perdiendo su actividad biológica dicha información nos brinda también F.A. CARY en su libro de Quimica Organica.

Como dijimos anteriormente esto ocurre debido a la disposición globular de la proteína que tiene forma de esferoide compacta de tal modo que los grupos hidrófilicos se orienten hacia el disolvente polar que es la acetona ya que presenta fuerzas de atracción dipolo –dipolo además del grupo carbonilo que presenta; mientras que su grupo hidrófobos se dirige hacia el interior pudiendo disolverse y por lo tanto se precipita esta afirmación también la hace M.NECHAMLEN

EN LOS TUBOS N°3 y N°5 la causa de la desnaturalización fue por cambios de PH al hacer la reacción de HNO3 Y H2S (AC) pues a valores muy altos o muy bajos de PH , las interacciones electroestáticas que normalmente estabilizan la forma activa de la proteína se reducen de manera significativa como lo dice el autor CAMBELL.

EN EL TUBO Nº4 Si se agrega a una solución de proteína en agua cantidades de sal, disminuye el coeficiente de actividad de la proteína y su solubilidad aumenta. Este fenómeno se llama disolución salina o “salting in” se debe a las fuerzas de atracción entre los iones de la proteína a concentración baja