TRABAJO PRÁCTICO No. 7 CARBOHIDRATOS: METODOS CUALITATIVOS Y CUANTITATIVOS.

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con las pruebas que reconocen propiedades y características determinadas de los carbohidratos.

3. Poner en práctica una marcha analítica de reconocimiento de azúcares.

4. Aislar glucógeno y/o carbohidratos totales de diversos tejidos de organismos.

5. Cuantificar por el reactivo de Antrona los niveles de glucógeno en c/u de los tejidos.

6. Establecer diferencias en cuanto a la concentración de carbohidratos totales entre los tejidos.

SECUENCIA EXPERIMENTAL

1. Identificar la presencia de carbohidratos en una muestra problema.

2. Reconocimiento de la presencia de mono y disacáridos en la muestra.

3. Identificación de cetosas y aldosas en una muestra

4. Extracción de glucógenos de los tejidos

5. Cuantificación de carbohidratos totales de las muestras.

2. Materiales y Métodos

2.1 Reactivos

• Soluciones acuosas de carbohidratos como muestra problema (glucosa, sacarosa, almidon, sucrosa, fructosa, galactosa, trealosa, maltosa)

• -naftol 50 g/l en alcohol etílico al 95% v/v

• Acido sulfúrico concentrado

• Ácido clorhídrico concentrado

• Reactivo de Molish: α-naftol al 10% en etanol

• Reactivo de Seliwanoff: disolver 50 mg de resorcinol en 0,1 l de ácido clorhídrico

• Solución de Fehling:

Solución A: 34,65 g de sulfato de cobre (CuSO4 x 5H20)por 500 ml de agua destilada. Filtrar.

Solución B: 173 g de Sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio, NaKC4H4O6 x 4H2O) y 50 g de NaOH en 500 ml de agua destilada. Filtrar.

• Reactivo de Benedict: disolver 17,3 g de sulfato de cobre, 173 g de citrato sódico y 100 g de carbonato sódico en c.s.p. 1 L de agua destilada.

• Reactivo de Barfoed: Disolver 90 g de acetato de cobre (cristalizado), agregar 6 ml de ácido acético glacial y c.s.p 1 L de agua destilada. Filtrar.

• Reactivo de Lugol: Disolver 4 g de yoduro de potasio y 1 g de yodo en 0,1L de agua destilada.

• Tubos de ensayo tipo pyrex, Pinzas para tubos de ensayo

• Pipetas de 1, 2 y 5 ml, Propipetas

• Gradillas

• Pipetas Pasteur con perita de goma

• Vórtex

• Baño de agua hirviendo o plancha de calentamiento

• Equipo de disección

• KOH 25% p/v

• Etanol 95%, Etanol Absoluto

• ácido tricloroacético 10%,

• Reactivo de Antrona: 2g/1000 ml de H2SO4

2.2 Métodos

Prueba Procedimiento

En un tubo de ensayo colocar: Volumen

P. de Molish Sustancia problema 1 ml

R. de Molish 2 gotas

Mezclar

H2SO4 concentrado

Dejar caer lentamente por las paredes del tubo. La aparición de un anillo violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos líquidos, indica que la muestra contiene carbohidratos. 0,50 ml

P. de Barfoed Sustancia problema 1 ml

Reactivo de Barfoed 2,5 ml

Mezclar y calentar en baño de agua hirviente, contando los minutos y sacar del baño cada tubo inmediatamente después que haya aparecido el precipitado rojo ladrillo de Cu2O. Anotar el tiempo que corresponda a cada carbohidrato.

La aparición de un precipitado rojo, antes de los 6 min. indica la presencia de un monosacárido. La aparición de un escaso precipitado rojo, entre 9 y 12 min indica la presencia de Lactosa o Maltosa.

P. de Bial Sustancia problema 1 ml

Reactivo de Bial 1.5 ml

Mezclar 1 ml

Llevar a baño de maría hirviente durante 3 min. La aparición de un color verde botella, brillante y totalmente transparente, indica la presencia de una pentosa. Algunos azucares dan con el Bial una coloración verde, pero está es opaca.

P. Seliwanoff Sustancia problema 1 ml

Reactivo de Seliwanoff: 2 ml

Llevar a baño de María hirviente durante 10min. La formación de un color rojo cereza, indica la presencia de fructosa.

P. de Lugol Sustancia problema 2 ml

Reactivo de Lugol: 1 gota

Mezclar y observar. La aparición de una coloración azul indica la presencia del almidón y una coloración roja, indica el glucógeno o eritrodextrina. Si el color no cambia, el carbohidrato es un monosacárido o un disacárido.

P. de Benedict Sustancia problema 0.5 ml

Reactivo de Benedict cualitativo 2 ml

Mezclar

Llevar a baño de María hirviente por 5 min.

La aparición de un precipitado verde, amarillo o rojo indica la presencia de un azúcar reductor.

P. de Fehling Sustancia problema 2 ml

Fehling A , Fehling B 1ml, 1ml

Caliente los tubos de ensayo en baño María durante unos minutos hasta que observe coloración rojiza en alguno de ellos y retire

2.3 Marcha Analítica