TRANSPORTE A TRAVÉS DE MEMBRANA         

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de levadura con 2,4-Dinitrofenol-

Se diluyó levadura de S. cerevisiae en un matraz Erlenmeyer que contenía 100 ml de solución salina glucosada.

Se coloco el matraz en un agitador magnético con mosca a mínima velocidad, para evitar romper las células de levadura.

Se agregó 0.1 ml de 2,4-dinitrofenol a la solución. A partir de este momento inició un conteo de 1 hora donde se extrajeron 3 muestras de 0.5 ml de la disolución; una al inicio y 2 c/30 min. Éstas se depositaron en 3 tubos de eppendorf marcados como T0, T1, y T2.

A las muestras tomadas se les metió en el congelador por 2 días para evitar  alteraciones en las  muestras. Pasados estos 2 dias, se prepararon diluciones de cada muestra y se les agregó 0.5 ml de agua y 1 ml de reactivo de Somogyi  y se metieron a baño maría por 20 min.

Pasado este periodo de tiempo se les enfrió utilizando agua de la llave; y se le añadió reactivo de arsenomolibdato y al terminar la reacción se agregaron 10 ml de agua. posteriormente se leyeron las absorbancias en el espectrofotómetro.

RESULTADOS

Para obtener los resultados se realizó una curva estándar mostrada en la figura 2.

En las muestras de levadura tratadas con dinitrofenol se pudo observar que hubo un consumo de glucosa considerable, para las muestras tratadas con KCN el consumo de glucosa se redujo considerablemente, ya que la cantidad de glucosa no se consumió más que la mitad. Para el tratamiento con calor la levadura consumió poco menos de la mitad que la levadura pero para las muestras del tubo 2 y 3 el cambio fue casi nulo. El caso del tratamiento control (el que no fue alterado con alguna otra sustancia) los resultados no

fueron precisamente los esperados, pues el consumo de glucosa fue mayor con respecto a todos los demás tratamientos, cuando lo esperado era que el mayor consumo de glucosa se viera en el tratamiento con dinitrofenol.

Tratamiento

Cantidad de glucosa en el remanente

Control

2.628

DNP

4

KCN

15.145

Calor

14.585

Tratamiento

Cantidad de glucosa consumida

Control

27.372

DNP

26

KCN

14.855

Calor

15.415

REFERENCIAS

Nelson, D.L y Cox, M.M.(2009) Lehninger: Principios de bioquímica.

McKee, T y McKee, J.R. (2003). Bioquímica: Las bases moleculares de la vida. Mc Graw Hill-Interamerican, 3a edición, España p.p 234-270

Riballo E. (1995). Tesis doctoral: Mecanismo de inactivación catabólica de las proteínas de membrana plasmática de Saccharomyces cerevisiae. Madrid: Instituto de investigaciones Biomédicas del C.S.I.C