ANÁLISIS DE TRANSCRIPCIONES RNA EN PACIENTES DE LEUCEMIA CRÓNICOS MYELOID

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Análisis estadístico

Los pacientes fueron separados en dos grupos (la presencia o la ausencia de exon b3), y la asociación con parámetros clínicos y hematological fue analizada usando la prueba de c2 o el Pescador la prueba exacta para parámetros categóricos y la prueba de t del Estudiante o la prueba de Mann-Whitney para parámetros continuos. Parámetros edad incluida, sexo, medida de hemoglobina, glóbulo blanco y cuentas de plaqueta, y porcentaje de ráfagas y basophils. El tamaño de bazo (expresado como el aumento comparando con de talla normal) y el índice de Sokal (mirar la Introducción) también fueron incluidos. Los datos no estaban disponibles para algunos pacientes.

La duración de la fase crónica fue calculada de la fecha del diagnóstico a la fecha de la fase acelerada o aguda. La definición de fases crónicas y agudas siguió los criterios descritos de Kantarjian et al. (1990). En nueve de los 33 casos, un análisis citológico también fue hecho durante la fase aguda de la enfermedad. B3a2 mRNA fue observado en tres de estos nueve casos, mientras que en cinco b2a2 mRNA fue visto y en un ambos tipos de mRNA fueron descubiertos. Un estudio combinado fue conducido en el cual los resultados relatados por otros fueron incluidos. Sólo los estudios en los cuales el tipo de mRNA fue determinado por pruebas con una sensibilidad similar a esto empleado en el estudio presente, p. ej., dos rondas consecutivas de PCR o una ronda con el empleo de sondas radiactivas para descubrir los fragmentos amplificados, fueron considerados. Los datos de los informes siguientes fueron usados en nuestra búsqueda para asociaciones entre el tipo de mRNA y parámetros clínicos: Yin et al. (1995) y Pastor et al. (1995) para el Sokal

RESULTADOS

Las condiciones para RT-PCR establecido con este trabajo proporcionaron la amplificación excelente de cDNA de BCR/ABL mRNA. El material analizó muestras incluidas de 33 pacientes, 25 tranquilo en la fase crónica y 13 en la fase acelerada de la enfermedad. En casos donde más que una muestra fue probada sobre ocasiones diferentes durante la fase crónica (dos pacientes), o en la fase crónica y subsecuente acelerada (tres pacientes), no había ninguna alteración en el tipo de transcripción obtenida. B3a2 mRNA fue descubierto en muestras de 14 de los pacientes CML, mientras que b2a2 mRNA fue observado en 13 casos y seis pacientes tenía ambos tipos de transcripciones. BCR/ABL mRNA fue descubierto después de la primera ronda de PCR en todos los casos excepto el que en el cual las células mononucleares mostraron una viabilidad baja. En cuatro de los seis casos con ambos tipos de transcripciones, el segundo tipo fue observado sólo después de la segunda ronda de PCR.

No había ningunas asociaciones significativas entre el tipo de mRNA y hematological o parámetros clínicos en el diagnóstico, o la duración de la fase crónica (la Mesa I). Un análisis combinado incluyendo nuestros resultados y aquellos hechos un informe en la literatura mostraron que la única asociación significativa estaba entre el tipo de mRNA y el sexo (la Mesa II), con un predominio de hombres en los grupos que expresan b2a2 (2.68:1) y b3a2 (1.33:1).

DISCUSIÓN

RT-PCR extensamente es usado para estudiar el gene híbrido BCR/ABL en CML. Pueden confirmar la especificidad de la reacción de amplificación la hibridación con sondas etiquetadas. Esto no era necesario en el estudio presente como la mayor parte de las muestras eran también ordenadas en un estudio paralelo (Meissner et al., 1998). Desde cartillas para exons b2 y a2 fue usado, la técnica no es apropiada por la identificación de mRNA con una unión e1a2 o para los casos raros donde el límite de facturación es M-bcr exterior. Biernaux et al. (1995) desarrolló PCR sumamente sensible anidado para descubrir CML residual. En las condiciones de alta severidad y el control estricto de aspectos positivos falsos, este ensaye fue capaz de descubrir BCR/ABL mRNA en individuos normales. Algunas diferencias importantes entre personas sanas y pacientes con CML aseguran que en condiciones normales RT-PCR es adecuado para el diagnóstico de CML. En el estudio por Biernaux et al. (1995), mRNA fue extraído de células en 100 ml de sangre comparada 1-5 ml generalmente usados para pacientes. En personas normales, el gene BCR/ABL fue descubierto sólo después de la segunda ronda de PCR, mientras que para pacientes CML una ronda era suficiente en la mayoría de los casos. Finalmente, la concentración de BCR/ABL mRNA en pacientes CML es de 5-6 transcripciones por célula (la furgoneta Rhee et al., 1996), mientras que Biernaux et al. (1995) encontró una concentración de 5-20 transcripciones por 5-10 x 107 células normales. El análisis molecular del cromosoma de Filadelfia en CML ha mostrado que, independiente de la posición del límite de facturación de M-bcr, el híbrido BCR/ABL el gene puede dar lugar a dos tipos principales de 8.5 kilobytes mRNA que se diferencia por el presencia de exon b3 (Nakamura et al., 1991; Molinos et al., 1991b). No lo saben si esta diferencia es reflejada en las propiedades de la proteína híbrida o en el fenotipo de enfermedad. Varios estudios, incluyendo éste, han mostrado que la clasificación CML según el tipo de mRNA no produce datos homogéneos clínicos o hematological. Aunque la discrepancia de cada parámetro fuera grande entre pacientes para cada tipo de mRNA, no había ningunas diferencias significativas entre los grupos, excepto la duración de la fase crónica para la cual la discrepancia en el grupo b3a2 era mayor que en el grupo b2a2 (P

La variación considerable en los parámetros dentro de cada grupo ha sido relatada en otros estudios que han investigado una correlación entre el tipo de mRNA o la región de límite de facturación de ADN y los parámetros clínicos o hematological en el diagnóstico. Morris et al. (1990) combinó sus resultados con aquellos de Shtalrid et al. (1988) y observado que los pacientes con límites de facturación en 5 ' M-bcr tenían una tendencia considerablemente más alta de desarrollar la crisis de ráfaga de myeloid, mientras que los 3 ' el límite de facturación de M-bcr fueron asociados con la crisis de ráfaga de lymphoid. Martinelli no confirmó esta asociación et al. (1991) cuando sus resultados fueron analizados juntos con aquellos de otros estudios.

La mayor parte de investigaciones han buscado para una asociación entre la línea de célula se amplió durante la crisis de ráfaga y límites de facturación en los 3 ' o 5 ' las regiones de M-bcr. A nuestro conocimiento, ningún estudio había analizado la asociación entre la crisis de ráfaga