Análisis serológico y Inmunoblotting

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Cada anticuerpo monoclonal se probó en el ensayo de inmuno reactividad con T. phagedenisbiotipo Reiter (regalo de JN Miller, UCLA), T. scoliodontum (regalo de JN Miller), T. vincentii (regalo de JN Miller), T. Marteilia (regalo de R. George, Centros para el Control de Enfermedades),Fusobacterium periodonticum (American Type Culture Collection [ATCC] 33693), T. denticola(ATCC 33520 y 33521), T. pectinovorum (ATCC 33763), y T. socranskii (ATCC 35536).

Ensayo Inmuno

Las muestras de placa seca y de controlar las bacterias secas se examinaron en las diapositivas como se ha descrito previamente con biotina conejo anti-ratón segundos anticuerpos y estreptavidina-fosfatasa alcalina. 16 láminas fueron vistos con un aumento de 1.000 × por un observador que desconocía el origen de la muestra y el anticuerpo monoclonal utilizado. Para cada muestra, campos de alta potencia 10 no se superponen (1000 ×) se examinaron para espiroquetas manchados. Una muestra se considera positiva si se observan uno o más espiroquetas manchados.

Análisis estadístico

La significación de las diferencias en la frecuencia de observaciones positivas entre los sujetos normales y sujetos con gingivitis o periodontitis se determinó por análisis de chi-cuadrado.

RESULTADOS

Las especificidades de anticuerpos monoclonales

B1A1, H9-1 y H9-2 reaccionó sólo con T. pallidum ( Tabla 1 TABLA 1[pic 1]Reactividad de los anticuerpos monoclonales. *). G2-1 hace reaccionar con todos los treponemas probadas.

Identificación de las espiroquetas en placa

Como se muestra en la Tabla 2 TABLA 2[pic 2]frecuencia con que se detectaron espiroquetas en la placa dental mediante anticuerpos monoclonales., las 10 muestras de control de la placa supragingival, pero sólo 1 de 14 muestras de control de la placa subgingival contenían espiroquetas detectables con el anticuerpo monoclonal C2-1 (esta muestra también era reactiva con el anticuerpo monoclonal patógeno restringida H9-2). Por el contrario, los 17 pacientes con gingivitis (P ​​comparación con 11 de los 17 sujetos con gingivitis (P

Figura 1 FIGURA 1[pic 3]espiroquetas en muestras de placa de pacientes con gingivitis después de la identificación con anticuerpos monoclonales C2-1 (paneles A y C) y B1A1 (paneles B y D).muestra treponemas de representación en la placa obtenidos de zonas de gingivitis ulcerativa e identificados mediante de anticuerpos monoclonales C2-1 (que reacciona con todas las espiroquetas) y B1A1 (que reacciona sólo con espiroquetas orales relacionadas con T. pallidum ).

La presencia de anticuerpos específicos en suero

Los resultados de los análisis serológicos se resumen en la Tabla 3 TABLA 3[pic 4]Los análisis de anticuerpos en suero.. Ninguna de las muestras de suero de sujetos normales o de los sujetos con gingivitis fueron reactivos en pruebas serológicas estándar para la sífilis, mientras que las muestras de suero de control positivo de pacientes no tratados con sífilis fueron uniformemente reactiva. Las muestras de suero de pacientes con periodontitis no estaban disponibles para estas pruebas.

Análisis de inmunotransferencia de muestras de suero de pacientes con gingivitis reveló IgG dirigida contra 47-kd, 37 kd, 14 kd y 12 kd-moléculas

(Tabla 2 , Fig. 2 FIGURA 2inmunotransferencias de suero humano con IgG contra los antígenos de T. pallidum subespeciepallidum .). [pic 5]

Más pacientes con gingivitis habían IgG dirigidos contra moléculas de 47 kd (15 de 19) y 12 kd-moléculas (15 de 19) de T. pallidumque contra otros antígenos. Catorce de estos pacientes tenían IgG a ambas moléculas-47 kd y 12 kd-. Doce de estos pacientes tenían anticuerpos frente a moléculas de 37 kD, siempre en asociación con IgG a 47 kD-moléculas y por lo general en asociación con anticuerpos frente a moléculas de 12 kD-(11 de 12 pacientes). Por lo tanto, 11 pacientes tenían anticuerpos al 47-kd, 37 kd, y las moléculas de 12 kd, y 3 tenían IgG a las cuatro moléculas que contienen determinantes específicos de patógenos de T.pallidum . En contraste, las muestras de suero de 5 de los 18 sujetos sanos normales tenían una débil reactividad frente a moléculas de 47 kd (P T. pallidum . Las muestras de suero no estaban disponibles de pacientes con periodontitis para inmunotransferencia.

DISCUSIÓN

Gingivitis ulcerativa necrotizante es una infección recurrente de la encía que rodea los dientes y por lo general se asocia con la aparición rápida, sangrado espontáneo, dolor, oris hedor, y papilas interdentales necrótico;puede progresar a periodontitis

( Fig. 3 FIGURA 3aguda necrotizante ulcerativa gingivitis.) [pic 6]

.Periodontitis crónica, caracterizada por la encía inflamada, la formación de bolsas entre la encía y el diente, y la pérdida de hueso alveolar, se pueden encontrar ya en la adolescencia y generalmente continúa mientras los dientes están presentes. La periodontitis es común después de la tercera década de la vida y es una causa frecuente de pérdida de dientes en las personas de edad. Las espiroquetas encontradas en la placa son comúnmente asociados con la gingivitis ulcerativa y. Periodontitis Se encuentran en la superficie de la placa por debajo de la línea de las encías, en contacto directo con el epitelio gingival, y que también se han encontrado en el tejido conjuntivo sano alrededor encía ulcerada. Sin embargo, no se sabe si espiroquetas orales son patógenas o meramente oportunista.

Dos observaciones independientes apoyan la conclusión de que una espiroqueta estrechamente relacionada con T. pallidum subespecie pallidum infecta a los seres humanos con gingivitis ulcerativa necrotizante y periodontitis crónicas del adulto. En primer lugar, se identificaron las espiroquetas en la placa con el uso de anticuerpos monoclonales específicos para patógenos subespecies de T. pallidum (y Lukehart S: datos no publicados). En segundo lugar, en las muestras de suero actuales de estudio de la mayoría de los pacientes con gingivitis ulcerativa reaccionado fuertemente con los de 47 kd y 37 kd-moléculas de T. pallidum que se sabe que contienen epítopos de patógenos específicos, mientras que sólo cinco de las muestras de suero de los sujetos sanos reaccionó débilmente con antígenos en estos dos sitios. La débil reactividad de suero normal a las 37-kd y 47 kd-moléculas de treponemas patógenos