Bioquímica Manual de Bioquímica: Discusiones

...

En la prueba Xanoproteica la cual es específica para detectar grupos R aromáticos se presentó la duda de que solo el Triptófano y la Tirosina daban positivo a la prueba ya que cuentan con un anillo aromático de acuerdo a Wade (3), pero la Fenilalanina que también cuenta con un anillo aromático daba un resultado negativo, pero la duda se descartó cuando se supo que la razón de que diera negativo se debía a que su anillo aromático no se encontraba activado según por lo mencionado por Wade (3). Por otro lado la solución problema dio positivo determinando así la presencia de Tirosina y Triptófano en ella.

En la prueba de Hopkins-Cole la cual es específica para detectar Triptófano no se presentaron inconvenientes ya que la única muestra que dio positivo adquiriendo un color violeta fue la muestra del Triptófano debido a que es el único aminoácido con los que se trabajó con un grupo indol por lo especificado por Wade (3), por otra parte la solución problema dio positivo confirmando así la presencia de Triptófano en la solución problema.

Durante la prueba del Nitroprusiato la cual es específica para determinar Cisteína, no se presentaron inconvenientes ya que la única muestra que reaccionó positivamente fue la que contenía la Cisteína formando un producto rojo, por otra parte la solución a diferencia de las otras pruebas dio un resultado negativo por lo que se descarta la presencia de Cisteína en ella.

En la prueba de Sakaguchi que consiste en detectar la presencia de Arginina, se presentó el inconveniente de que todas las muestras presentaron colores muy cercanos al rojizo, por lo que no se sabía con certeza si estos también podían ser tomados como resultados positivos, aunque finalmente se descartaron como positivos, dejando únicamente a la Arginina y la solución problema como positivos, determinando así la presencia de Arginina en la solución problema.

Finalmente en la prueba Pauly la cual es específica para determinar ciertos tipos R como fenoles, imidazoles y aminas, como lo son la Histidina, Triptófano y Tirosina como Lehninger (2) lo explica, tan solo las muestras con Histidina, Triptófano y Tirosina reaccionaron positivamente, por lo que se dice que la prueba no presento inconvenientes, aunque la duda viene en que la solución problema dio positivo pero no se sabe si dio positivo también para la Histidina ya que no se realizaron pruebas con anterioridad para determinar la presencia de este aminoácido en la solución problema.

Para terminar la práctica solo se determinó que la solución problema estaba compuesta por Arginina, Triptófano y Tirosina, aunque sigue la duda si cuenta también con la presencia de Histidina en ella.

Conclusiones:

Conocer y saber cómo realizar pruebas cualitativas específicas para ciertos aminoácidos nos ayudan a determinar de forma correcta y clara la presencia de algunos aminoácidos específicos en cualquier solución, aunque algunas pruebas no resultan ser específicas para un solo tipo de aminoácido por lo que en varias ocasiones se tendrá la incertidumbre si la solución dio positiva por la presencia de uno u otro aminoácido, como fue el caso de la solución problema en la elaboración de la práctica, no se pudo concluir si la solución problema contenía histidina porque aunque dio positiva para esta prueba, también contaba con triptófano y tirosina que también dieron positivo a la prueba.

Bibliografía:

- Lehman J. W. (1981). Operational Organic Chemestry, Inc. Pp 199-207

- Lehninger (2009). Principios de Bioquímica. Barcelona, España. Ediciones Omega S.A. pp. 71 – 76.

- Wade L. G. (2004). Química Orgánica. Madrid, España. Pearson Education S.A. pp. 1114 – 1129.

Discusiones Práctica 7:

Los aminoácidos tienen al menos dos grupos disociables, el grupo amino y el grupo carboxilo, aunque pueden tener más si el grupo R tiene a su vez grupos ionizables. La titulación de un aminoácido muestra el espectro del pH sobre su estructura y está a su vez es una herramienta útil para determinar la reactividad de las cadenas laterales de los aminoácidos según lo dicho por Boyer (1).

En la práctica se trabajó con glicina el cual es un aminoácido que solo cuenta con dos grupos disociables, por lo que su curva de titulación solo mostrará dos regiones como lo explica Lehninger (2). Se empezó a trabajar con la glicina a pH=1 para poder identificar de forma correcta el comportamiento de está frente a la adición de una base fuerte como puede ser el NaOH. Para poder observar el comportamiento de forma adecuada se fueron añadiendo 0.5 mL de NaOH cada 5 segundos y registrando el pH después de cada adición.

Durante los primeros 6.0 ml aficionados no se presentaron grandes variaciones en el pH medido, por lo que se dice que la primera región tamponante y pK se encuentra en este intervalo de pH. Comparando con la curva de titulación de la glicina elaborada por Wade (3), no se observó diferencia respecto a los pH obtenidos por lo que se descartó un posible error durante las primeras mediciones.

Durante la adición de 6 ml - 8.5 mL de NaOH se presentó un incremento brusco del pH, esto se debió a que durante este intervalo el porcentaje de HA y A se encuentran 100-0 ocasionando este incremento. Nuevamente se comparó con la curva de titulación de la glicina de Wade (3), para observar si se presentaba un error durante este intervalo de mL añadidos, pero al no notar una diferencia evidente se descartó el posible error.

Finalmente después de los 9 mL añadidos, el pH volvió a regularse, ya que mostraba muy pequeñas diferencias cada que se le adicionaban 0.5 mL por lo que se puede decir que la segunda región tamponante se encontró en el intervalo de 9 mL a 12 mL debido a que el pH permaneció "constante" en esta región, deduciendo así que el pKa2 se encontraba en esta región.

Una vez que se contaron con todos los valores del pH tabuladoa se pasó a la elaboración de la curva de la titulación de la glicina para poder observar mejor su comportamiento y determinar con mayor eficacia las regiones tamponante, los pKa y el pI. Con nuestra curva de titulación terminada se pasó a comprar nuevamente con la curva de titulación Wade (3), para observar si se mostraba alguna diferencia evidente, pero al no ser así se descartaron todos los posibles errores respecto a esta práctica

Aunque cabe destacar que al determinar los pKa experimentales, la cantidad de mL necesarios para titular los grupos