CULTIVOS DE MICROORGANISMOS

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Después de las 24 a 48 horas pasadas se pudo observar las diferentes características de las diferentes bacterias como su forma y tamaño.

Lo mismo sucedió en el caso del caldo, se dejó la muestra de un plazo de 24 a 48 horas y allí se pudo observar las diferencias que caracterizan.

- Resolución del cuestionario

- ¿Por qué algunos microorganismos desarrollan en caldo un característico crecimiento tipo película? ¿Qué factores ambientales podrían alterar la formación de una película superficial?

El crecimiento tipo película es la acumulación de los microorganismos que se están cultivando en la superficie del medio de cultivo, en este caso del caldo nutritivo. Los microorganismos se acumulan allí por tener respiración tipo aerobia. Al ser el oxígeno poco soluble en agua no penetra en la totalidad del tubo, y se concentra en la superficie del medio donde se agrupan los microorganismos, formando la película.

La concentración del oxígeno ambiental que disiparía la acumulación de microorganismos en la superficie del medio o factores como el aumento de temperatura pueden también causar la muerte del microorganismo.

- ¿Cuándo utiliza tubos de agra inclinado para el estudio de las características de crecimiento? ¿Es preferible inocular con aguja de Kolle y no con asa? ¿Por qué?

Cuando la aguja de Kolle, a diferencia del asa, facilita el sembrado del inóculo en el agar debido a que es necesario hacer la estría sobre éste, la cual debe realizase desde la base hasta el borde del medio, asegurando de este modo el crecimiento de los microorganismos. Además, la cantidad de inóculo debe ser moderada y el asa tiende a recoger muestras abundantes.

- ¿Qué factores influyen en la abundancia del crecimiento en caldo, agar inclinado y agar vertical?

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio

- ¿Qué procedimiento seguiría a continuación del desarrollado en estos ejercicios para obtener el cultivo puro de cada cepa contenida en la mezcla? ¿Cómo podríamos comprobar que estas cepas obtenidas finalmente corresponden a las colonias aisladas?

Luego de tener las colonias aisladas, estas deben transferirse con el filamento a un tubo que contenga agar nutritivo estéril para cultivar esa colonia aislada; este procedimiento se conoce como trasplante. Para garantizar la pureza del cultivo obtenido, es conveniente, a partir de cada tipo de colonia aislada, repetir el proceso de aislamiento antes descrito. Se considerará que se ha obtenido un cultivo puro, cuando al realizar este proceso, todas las colonias obtenidas presenten las mismas características.

El medio de cultivo utilizado en el proceso de aislamiento dependerá, entre otros factores, de los requerimientos nutricionales de los microorganismos que se espera aislar y de la presencia de microorganismos que, por sus características y/o por la cantidad en que se encuentren en la muestra, dificulten la obtención del microorganismo objeto del aislamiento. En este último caso, se deben utilizar medios de enriquecimiento y medios selectivos que inhiban el desarrollo de gérmenes contaminantes corresponden a las colonias aisladas.

La temperatura y otras condiciones de incubación, variarán según los microorganismos, usualmente la temperatura óptima de los microorganismos patógenos para el hombre oscila entre 30 y 40ºC. Cuando el microorganismo que se intenta aislar es anaeróbico, deben tomarse las precauciones necesarias a fin de eliminar la presencia de oxígeno en el ambiente donde se desarrollará el mismo. Basándose en el origen y naturaleza dela muestra se pueden inferir los posibles microorganismos que se encuentran presentes en la misma, y ese conocimiento ayudará en la selección del medio y las condiciones de cultivo adecuadas. Para iguales fines, es de gran utilidad el conocimiento de la procedencia de la muestra analizada.

- ¿Qué factores limitan el tamaño de las colonias en una placa de cultivo?

Existen diversos factores que limitan el tamaño de las colonias en una placa de cultivo; una de ellas es el pH, dependiendo del rango de pH del medio; el contenido de agua, influenciar en la forma y tamaño de la colonia; el potencial de óxido reducción; el contenido nutricional presente en el medio cultivo; los constituyentes anti microbiales y las estructuras bilógicas.

- Suponga que recibe una muestra de leche en polvo y se le pide determinar el número total de colonias por gramo. Plantee una metodología cuantitativa basada en diluciones sucesivas para resolver el problema.

El método de recuento en placa consiste en sembrar por duplicado 1 ml de la muestra liquida o 1ml de la dilución madre en placas Petri estériles. Se repite esta operación encada una de las diluciones decimales preparados. Verter 15 ml de agar VRBL a 45ºC, mezclar y dejar solidificar, preparar de la misma manera una placa testigo, para controlar la esterilidad del medio, cubrirla con 4ml del mismo medio a 45ºC. Dejar solidificar e incubar a 30ºC durante 24 a 48 horas. Se contabiliza las colonias de diámetro mayor o igual a 0.5mm en las placas que contengan 150 colonias características o de 30 a 300 colonias. Por medio de la densidad se podrá hallar el número de colonias por gramo.

- ¿En qué consiste la técnica del número más probable y que usos tiene?

EL METODO DE NUMERO MAS PROBABLE (NMP) es una estrategia eficiente de estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una evaluación cuantitativa de células individuales no es factible. La técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia (pos o neg) en réplicas de diluciones consecutivas de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes. Por lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utilizarse. El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística.

- Muestras: Colecte asépticamente muestras frescas de suelo (10 g) de varios lugares u obtenga muestras de agua (10 ml) de lagos, ríos o charcas.

- Extracción de microorganismos viables: Para muestras de suelo, las células podrán ser

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